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hobers

铁虫 (初入文坛)

[交流] 超长引物PCR

老板在国外带回一个新质粒要我们做,首先要做一个超长引物的PCR过程,因为引物里要加上信号肽和his标签等,上游引物长达97个碱基,下游引物也有51个碱基,请问:

1.这样的引物要如何分析确定是否可以用于PCR?
2.PCR程序又要怎么设置??

望高手赐教!!不胜感激!

上游引物:5-GCTGGATCCATGAAATTCTTAGTCAACGTTGCCCTTGTTTTTATGGTCGTGTACATTTCTTACATCTATGCGCAACTGTGGAGATGTCAGAGGCAGT-3
下游引物:5-CGTAAGCTTTTAGTGATGGTGATGGTGATGGGGCCATGCTCTGAATGGGCA-3
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nancysea

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by keilion at 2009-10-11 23:12:
引物的确很长,难度较大。希望有高人指点吧!

如果是以质粒为模板,应该不难扩增,可以用两步法结合Touchdown的方法,
如果模板是cDNA那么还是分段扩增好
9楼2009-10-12 10:21:13
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查看全部 17 个回答

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这个引物也太长了吧!光合成出来就不便宜啊~为什么不分几次进行PCR扩增呢?
2楼2009-10-11 22:24:13
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keilion

铜虫 (小有名气)

引物的确很长,难度较大。希望有高人指点吧!
3楼2009-10-11 23:12:12
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0): 10-12 08:17
引用回帖:
Originally posted by hobers at 2009-10-11 22:15:
老板在国外带回一个新质粒要我们做,首先要做一个超长引物的PCR过程,因为引物里要加上信号肽和his标签等,上游引物长达97个碱基,下游引物也有51个碱基,请问:

1.这样的引物要如何分析确定是否可以用于PCR? ...

质粒已经有了,引物是用来扩什么的?你要在质粒的基础上自己重新构建一个质粒吗?
说说你质粒的大小,用途,还有你为什么要设计这对引物,越详细越好
大家好帮助比啊
小木虫之有关部门负责人
4楼2009-10-11 23:17:38
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