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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 枯草芽孢杆菌基因敲除
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【悬赏金币】回答本帖问题，作者andyzhengwp将赠送您 50 个金币

andyzhengwp

金虫 (小有名气)

[求助] 枯草芽孢杆菌基因敲除 已有1人参与

最近在用pJOE8999对枯草芽孢杆菌基因进行基因敲除，电转诱导表达之后涂平板挑单克隆获得突变体、测序验证也正确，在去除质粒之后跑胶检测发现都变成野生型了，想问问虫友这是为什么？有什么解决方法吗？
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每天坚持一点点，终会成功！相信自己
1楼 2023-10-12 11:08:50
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
假阳性

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2楼2023-10-12 12:29:13
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andyzhengwp

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2023-10-12 12:29:13
假阳性

这种状况是怎么发生的呢？为什么测序之类的都正确的呢？
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每天坚持一点点，终会成功！相信自己
3楼2023-10-16 10:46:42
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
测序的是转进去的未整合的敲除载体

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4楼2023-10-17 10:52:03
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andyzhengwp

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by biosci at 2023-10-17 10:52:03
测序的是转进去的未整合的敲除载体

可是我的引物设计的位置为上游引物在左同源臂上游、下游引物在右同源臂下游，扩出来的片段不可能是载体上的啊
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5楼2023-10-19 09:26:37
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
扩出来大小一致的片段，最好要测序确认是不是

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6楼2023-10-19 11:30:44
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andyzhengwp

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by biosci at 2023-10-19 11:30:44
扩出来大小一致的片段，最好要测序确认是不是

测序结果没问题的啊
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7楼2023-10-19 15:04:59
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
野生芽孢杆菌对吗

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8楼2023-10-20 15:59:31
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eeroke

铜虫 (初入文坛)
求助，可以分享这个敲除质粒吗？谢谢
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9楼2024-01-05 14:44:48
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donkey2014

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by eeroke at 2024-01-05 14:44:48
求助，可以分享这个敲除质粒吗？谢谢

我有pJOE8999， 需要可以私信
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10楼2024-01-06 07:38:46
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