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长安某吖

铁虫 (初入文坛)

[求助] 用CRISPR技术进行基因敲除后消除质粒后基因回补了

各位师兄师姐,老师们,我最近在做基因敲除的时候,用的CRISPR技术,使用的是pJOE8999质粒,菌株是苏云金芽孢杆菌,在消除基因的时候,电转进入芽孢杆菌后送了一次测序,测序结果是敲除掉了,然后进行无抗LB转接三次消除质粒后,所有点板的菌株都回补了敲除的那个基因,因为本人也对这个也不太了解,(但是也不懂,还是去别人课题组学习的技术,对方实验室也无法给出答案,说没有遇到过,也尝试过解决这个问题,用T2系统敲除法也试过,但是也是在第二次单交换回补了,那就可能是同源交换发生在同一侧,但是pJOE8999就不是这个原因)有没有师兄师姐或者老师,能解答一下孩子的问题嘛 非常感谢
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衣带渐宽终不悔,为伊消得人憔悴。
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长安某吖

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2023-09-24 22:31:04
就是假阳性,开始就没敲除成功

测序了也是假阳性嘛

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衣带渐宽终不悔,为伊消得人憔悴。
3楼2023-09-24 23:30:02
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)


就是假阳性,开始就没敲除成功

发自小木虫Android客户端
2楼2023-09-24 22:31:04
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)


你那个是扩增的同源臂是吧

发自小木虫Android客户端
4楼2023-09-25 16:54:23
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长安某吖

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by biosci at 2023-09-25 16:54:23
你那个是扩增的同源臂是吧

是的

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衣带渐宽终不悔,为伊消得人憔悴。
5楼2023-09-26 18:24:20
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