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用CRISPR技术进行基因敲除后消除质粒后基因回补了
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 各位师兄师姐，老师们，我最近在做基因敲除的时候，用的CRISPR技术，使用的是pJOE8999质粒，菌株是苏云金芽孢杆菌，在消除基因的时候，电转进入芽孢杆菌后送了一次测序，测序结果是敲除掉了，然后进行无抗LB转接三次消除质粒后，所有点板的菌株都回补了敲除的那个基因，因为本人也对这个也不太了解，（但是也不懂，还是去别人课题组学习的技术，对方实验室也无法给出答案，说没有遇到过，也尝试过解决这个问题，用T2系统敲除法也试过，但是也是在第二次单交换回补了，那就可能是同源交换发生在同一侧，但是pJOE8999就不是这个原因）有没有师兄师姐或者老师，能解答一下孩子的问题嘛 非常感谢 |
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