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smiles292

铁杆木虫 (正式写手)

暂无方向

[交流] [求助]考马斯蓝溶液的配制

本人现在做实验需要使用考马斯蓝溶液定量蛋白,可是我手头上只有考马斯蓝R250,不是G250,请问这两者除了显色时间不同,其他的是不是差不多,也就是R250是不是也可以用于蛋白的检测?还有就是溶解考马斯蓝的时候用95%的乙醇是为什么?可不可以用100%的乙醇的,谢谢!!
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悲催莫过于让一个物化的去搞蛋白
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qingzi8575

银虫 (正式写手)


smiles292(金币+1,VIP+0):可以告诉我为什么么?根据是什么啊? 10-9 15:20
我只知道R250不可以测蛋白浓度
2楼2009-10-09 15:05:36
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qingzi8575

银虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
smiles292(金币+1,VIP+0):这种在网上都能查到,我想要更有说服力的数据 10-11 16:38
amisking(金币+3,VIP+0): 10-24 15:27
考马斯亮蓝R250(Coomassie brilliant blue R250)。C45H44O7H3S2Na,MW=824,λmax=560―590nm。染色灵敏度比氨基黑高5倍。尤其适用于SDS电泳微量蛋白质染色。但蛋白质浓度超出一定范围时,对高浓度蛋白的染色不符合Beer定律,用作定量分析时要注意这点。
考马斯亮蓝G250,又名Xylene brilliant cyaninG。比考马斯亮蓝R250多二个甲基。MW=854;λmax=590―610nm。染色灵敏度不如R250,但比氨基黑高3倍。优点在于它在三氯乙酸中不溶而成胶体,能选择地染色蛋白而几乎无本底色。所以常用于需要重复性好和稳定的染色,适于作定量分析。
3楼2009-10-09 15:33:20
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smiles292

铁杆木虫 (正式写手)

暂无方向

我自己做了,给大家看看吧,用R250染色,两个小时吸收光谱根本没有变化,用G250,五分钟即可,所以说用R250根本就不能染色
悲催莫过于让一个物化的去搞蛋白
4楼2009-10-24 15:04:39
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wangqk198738

金虫 (正式写手)

完全弄错了吧

★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+3,VIP+0): 10-24 17:37
smiles292(金币+2,VIP+0):唉,我都自己尝试了,况且网上根本就没有找到。浪费样品啊,谢谢你的滤纸!! 10-25 19:13
R250怎么能测浓度呢?是G250才对,这基本的最简单的事情在网上都可以搞的定,一些论文专注里面都有的,看来你是个新手吧,好好学啊!G250在配治的时候是不能用水的,不溶的。必须的用灰分少的滤纸过滤掉杂质。要不你会发现在测定的时候数值持续的变动,不会稳定的。小心磷酸啊,放热啊!
5楼2009-10-24 16:43:14
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speculiar

银虫 (小有名气)

R250是染蛋白胶用的 G250是测蛋白质含量的
6楼2009-10-24 17:25:11
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himoo123

铁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
R250也可以用来染色的其实
7楼2009-10-29 16:34:09
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可以用100%的乙醇的,稀释一下就可以了
将有能量帮助他人作为自己的人生追求!
8楼2009-10-29 19:19:16
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smiles292

铁杆木虫 (正式写手)

暂无方向

引用回帖:
Originally posted by zcqcau at 2009-10-29 19:19:
可以用100%的乙醇的,稀释一下就可以了

也就是说只要乙醇量是一定的就可以了?
悲催莫过于让一个物化的去搞蛋白
9楼2009-10-31 11:24:18
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mcl49510

铜虫 (小有名气)

考马斯亮蓝试剂:
考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇,加入100ml 85% H3PO4,雍蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤。最终试剂中含0.01%(W/V)考马斯亮蓝G—250,4.7%(W/V)乙醇,8.5%(W/V)H3PO4。
最好用G250,因为它与Pr结合紧密,在595nm有强吸收,而R250与PR的结合力弱,是用来做变性电泳染色的染色剂。
10楼2009-11-14 10:40:38
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