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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » [求助]考马斯蓝溶液的配制
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smiles292

铁杆木虫 (正式写手)

暂无方向

[交流] [求助]考马斯蓝溶液的配制

本人现在做实验需要使用考马斯蓝溶液定量蛋白，可是我手头上只有考马斯蓝R250，不是G250，请问这两者除了显色时间不同，其他的是不是差不多，也就是R250是不是也可以用于蛋白的检测？还有就是溶解考马斯蓝的时候用95%的乙醇是为什么？可不可以用100%的乙醇的，谢谢！！
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1楼 2009-10-09 15:03:40
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qingzi8575

银虫 (正式写手)
★
smiles292(金币+1,VIP+0):可以告诉我为什么么？根据是什么啊？ 10-9 15:20
我只知道R250不可以测蛋白浓度
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2楼2009-10-09 15:05:36
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qingzi8575

银虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
smiles292(金币+1,VIP+0):这种在网上都能查到，我想要更有说服力的数据 10-11 16:38
amisking(金币+3,VIP+0): 10-24 15:27
考马斯亮蓝R250（Coomassie brilliant blue R250）。C45H44O7H3S2Na，MW=824，λmax=560―590nm。染色灵敏度比氨基黑高5倍。尤其适用于SDS电泳微量蛋白质染色。但蛋白质浓度超出一定范围时，对高浓度蛋白的染色不符合Beer定律，用作定量分析时要注意这点。
考马斯亮蓝G250，又名Xylene brilliant cyaninG。比考马斯亮蓝R250多二个甲基。MW=854；λmax=590―610nm。染色灵敏度不如R250，但比氨基黑高3倍。优点在于它在三氯乙酸中不溶而成胶体，能选择地染色蛋白而几乎无本底色。所以常用于需要重复性好和稳定的染色，适于作定量分析。
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3楼2009-10-09 15:33:20
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smiles292

铁杆木虫 (正式写手)

暂无方向
我自己做了，给大家看看吧，用R250染色，两个小时吸收光谱根本没有变化，用G250，五分钟即可，所以说用R250根本就不能染色
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悲催莫过于让一个物化的去搞蛋白
4楼2009-10-24 15:04:39
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wangqk198738

金虫 (正式写手)

完全弄错了吧

★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+3,VIP+0): 10-24 17:37
smiles292(金币+2,VIP+0):唉，我都自己尝试了，况且网上根本就没有找到。浪费样品啊，谢谢你的滤纸！！ 10-25 19:13
R250怎么能测浓度呢？是G250才对，这基本的最简单的事情在网上都可以搞的定，一些论文专注里面都有的，看来你是个新手吧，好好学啊！G250在配治的时候是不能用水的，不溶的。必须的用灰分少的滤纸过滤掉杂质。要不你会发现在测定的时候数值持续的变动，不会稳定的。小心磷酸啊，放热啊！
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5楼2009-10-24 16:43:14
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speculiar

银虫 (小有名气)
R250是染蛋白胶用的 G250是测蛋白质含量的
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6楼2009-10-24 17:25:11
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himoo123

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
R250也可以用来染色的其实
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7楼2009-10-29 16:34:09
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以用100%的乙醇的，稀释一下就可以了
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将有能量帮助他人作为自己的人生追求！
8楼2009-10-29 19:19:16
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smiles292

铁杆木虫 (正式写手)

暂无方向
引用回帖:
Originally posted by zcqcau at 2009-10-29 19:19:
可以用100%的乙醇的，稀释一下就可以了

也就是说只要乙醇量是一定的就可以了？
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悲催莫过于让一个物化的去搞蛋白
9楼2009-10-31 11:24:18
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mcl49510

铜虫 (小有名气)
考马斯亮蓝试剂：
考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，雍蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250,4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。
最好用G250，因为它与Pr结合紧密，在595nm有强吸收，而R250与PR的结合力弱，是用来做变性电泳染色的染色剂。
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10楼2009-11-14 10:40:38
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