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我想查看一种组织内的胶原纤维束排列情况，不知道使用什么方法。 组织主要成分： 胶原纤维 脂肪 其中胶原纤维束直径较粗，肉眼就可以看见，所以不需要太大的放大倍数。 附上20倍的组织照片。 请指教！谢谢！ [ Last edited by amisking on 2009-10-9 at 20:39 ] |
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HarveyWang
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蛋白组织最简单的方法：考马斯亮蓝G250或R250 染色，用以区分蛋白组织和脂肪。 考染液：考马斯亮蓝G250或R250 染色 1g， 甲醇450ml溶解，然后加冰乙酸100 ml，水450ml。 可以直接染色（等不及先看看嘛 ^_^），也可以脱水固定后染色，但是最好是薄片的。 然后用脱色液清洗（ 乙醇300ml，然后加冰乙酸100 ml，水600ml）。染色轻重自己要摸索掌握好。1-2min即可。 其他染色方法，我转来的，供参考 ^_^ -------------------------------------------------------- 胶原纤维是三种纤维中分布最广泛，含量最多的一种纤维。广泛分布于各脏器内。在皮肤、巩膜和肌腱最为丰富。胶原纤维染色主要用于和肌纤维的鉴别。 目录 [隐藏] 1 介绍 2 相关条目 胶原纤维 介绍 胶原纤维（collagenous fiber）胶原纤维在疏松结缔组织中排列成束，彼此交织吻合，纤维束常有分支。纤维具有韧性，抗牵引力强。电镜观察，胶原纤维由更细的微原纤维（microfibrils）组成。微原纤维有特殊的横带，其周期为64nm。每条微原纤维有一序列的明暗带。暗带中比明带有较多游离的化学根，所以贮留较多的电镜切片染色剂 胶原纤维主要含有胶原蛋白，氨基酸有甘氨酸、脯氨和羟脯氨酸等。胶原是唯一含羟脯氨酸较多的蛋白质，因此，测定羟脯氨酸的量能确定组织中胶原的含量。胶原蛋白占全身蛋白质的30％。聚合成胶原的微原纤维的蛋白质分子称为原胶原分子。 苦味酸—酸性品红法 试剂配制： Weigert氏铁苏木素液 两液需分瓶盛放，A液配制后数天即可用，不宜配制过多，如保存时间过长则染色不良。平时应密封保存，B液配制后立即可用。临用前将A、B两液等量混合。 VanGieson氏染液 A液：1％酸性品红水溶液 B液：苦味酸饱和水溶液(约1.2％)A、B两液分瓶盛放。临用前取A液1份，B液9份混合后使用。 操作方法： 1.组织固定于10％甲醛液，常规脱水包埋。 2．切片脱蜡至水。 3．用Weigert氏铁苏木素液染5～10分钟。 4.流水稍洗。 5．1％盐酸酒精迅速分化。 6.流水冲洗数分钟。 7．用VanGieson氏液染1～2分钟。 8．倾去染液，直接用95％酒精分化和脱水（可放入温箱烤干后，直接透明封片）。 9.无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固 结果胶原纤维呈鲜红色，肌纤维，胞质及红细胞黄色，胞核蓝褐色。 （二）、Masson三色染色法 丽春红酸性品红液：丽春红0.7g，酸性品红0.3g，蒸馏水99ml，冰醋酸1ml 苯胺蓝液:苯胺蓝2g，蒸馏水98ml，醋酸2ml亮绿液：亮绿0.2g，蒸馏水100ml， 冰醋酸0.2ml染色步骤：1.切片脱蜡至蒸馏水2.苏木素染5～10分钟3.盐酸酒精分化4.流水蓝化，蒸馏水洗(苏木素可不染)5.丽春红酸性品红液中染5～8分钟6.蒸馏水洗7.1%磷钼酸中染1～3分钟8.不用水洗直接入苯胺蓝液或亮绿液5分钟(如染色效果不佳,可在冰醋酸内脱色后重染)9.水速洗，置60℃温箱中烘干，二甲苯透明,封固结果:胶原纤维蓝色（苯胺蓝复染）或绿色（亮绿复染）,肌纤维、纤维素红色。 注意事项： 1．组织用Bouin氏液固定为佳。。2．用l％磷钼酸处理时可在镜下控制，见肌纤维呈红色，胶原纤维呈淡红色即可。 给你几本重要的参考文献，图书馆应该有的： 1、王伯沄，李玉松，黄高升，张远强《病理学技术》 2、凌启波《实用病理特殊染色和组化技》 3、刘介眉等《病理组织染色的理论方法和应用》 [ Last edited by HarveyWang on 2009-10-11 at 10:22 ] |
7楼2009-10-11 10:19:45
pkming
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2楼2009-10-09 20:32:52
5楼2009-10-10 22:51:52
salooloo001
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