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s08t109

新虫 (初入文坛)

[交流] 真心求助

我想查看一种组织内的胶原纤维束排列情况,不知道使用什么方法。
组织主要成分: 胶原纤维  脂肪
其中胶原纤维束直径较粗,肉眼就可以看见,所以不需要太大的放大倍数。
附上20倍的组织照片。
请指教!谢谢!

[ Last edited by amisking on 2009-10-9 at 20:39 ]
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s08t109

新虫 (初入文坛)

谢谢
司马诸葛,amisking
5楼2009-10-10 22:51:52
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pkming

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
哦不知道,帮你顶一下,别沉了
2楼2009-10-09 20:32:52
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by s08t109 at 2009-10-9 14:30:
我想查看一种组织内的胶原纤维束排列情况,不知道使用什么方法。
组织主要成分: 胶原纤维  脂肪
其中胶原纤维束直径较粗,肉眼就可以看见,所以不需要太大的放大倍数。
附上20倍的组织照片。
请指教!谢谢! ...

蛋白组织最简单的方法:考马斯亮蓝G250或R250 染色,用以区分蛋白组织和脂肪。
考染液:考马斯亮蓝G250或R250 染色 1g, 甲醇450ml溶解,然后加冰乙酸100 ml,水450ml。
可以直接染色(等不及先看看嘛 ^_^),也可以脱水固定后染色,但是最好是薄片的。
然后用脱色液清洗( 乙醇300ml,然后加冰乙酸100 ml,水600ml)。染色轻重自己要摸索掌握好。1-2min即可。



其他染色方法,我转来的,供参考 ^_^
--------------------------------------------------------

胶原纤维是三种纤维中分布最广泛,含量最多的一种纤维。广泛分布于各脏器内。在皮肤、巩膜和肌腱最为丰富。胶原纤维染色主要用于和肌纤维的鉴别

目录 [隐藏]
1 介绍
2 相关条目
胶原纤维 介绍   
胶原纤维(collagenous fiber)胶原纤维在疏松结缔组织中排列成束,彼此交织吻合,纤维束常有分支。纤维具有韧性,抗牵引力强。电镜观察,胶原纤维由更细的微原纤维(microfibrils)组成。微原纤维有特殊的横带,其周期为64nm。每条微原纤维有一序列的明暗带。暗带中比明带有较多游离的化学根,所以贮留较多的电镜切片染色剂

胶原纤维主要含有胶原蛋白,氨基酸有甘氨酸、脯氨和羟脯氨酸等。胶原是唯一含羟脯氨酸较多的蛋白质,因此,测定羟脯氨酸的量能确定组织中胶原的含量。胶原蛋白占全身蛋白质的30%。聚合成胶原的微原纤维的蛋白质分子称为原胶原分子。

苦味酸—酸性品红法
试剂配制:
Weigert氏铁苏木素液
两液需分瓶盛放,A液配制后数天即可用,不宜配制过多,如保存时间过长则染色不良。平时应密封保存,B液配制后立即可用。临用前将A、B两液等量混合。
VanGieson氏染液
A液:1%酸性品红水溶液
B液:苦味酸饱和水溶液(约1.2%)A、B两液分瓶盛放。临用前取A液1份,B液9份混合后使用。
操作方法:
1.组织固定于10%甲醛液,常规脱水包埋。
2.切片脱蜡至水。
3.用Weigert氏铁苏木素液染5~10分钟。
4.流水稍洗。
5.1%盐酸酒精迅速分化。
6.流水冲洗数分钟。
7.用VanGieson氏液染1~2分钟。
8.倾去染液,直接用95%酒精分化和脱水(可放入温箱烤干后,直接透明封片)。
9.无水酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固
结果胶原纤维呈鲜红色,肌纤维,胞质及红细胞黄色,胞核蓝褐色。
(二)、Masson三色染色法
丽春红酸性品红液:丽春红0.7g,酸性品红0.3g,蒸馏水99ml,冰醋酸1ml
苯胺蓝液:苯胺蓝2g,蒸馏水98ml,醋酸2ml亮绿液:亮绿0.2g,蒸馏水100ml,

冰醋酸0.2ml染色步骤:1.切片脱蜡至蒸馏水2.苏木素染5~10分钟3.盐酸酒精分化4.流水蓝化,蒸馏水洗(苏木素可不染)5.丽春红酸性品红液中染5~8分钟6.蒸馏水洗7.1%磷钼酸中染1~3分钟8.不用水洗直接入苯胺蓝液或亮绿液5分钟(如染色效果不佳,可在冰醋酸内脱色后重染)9.水速洗,置60℃温箱中烘干,二甲苯透明,封固结果:胶原纤维蓝色(苯胺蓝复染)或绿色(亮绿复染),肌纤维、纤维素红色。
注意事项:
1.组织用Bouin氏液固定为佳。。2.用l%磷钼酸处理时可在镜下控制,见肌纤维呈红色,胶原纤维呈淡红色即可。

给你几本重要的参考文献,图书馆应该有的:

1、王伯沄,李玉松,黄高升,张远强《病理学技术》

2、凌启波《实用病理特殊染色和组化技》

3、刘介眉等《病理组织染色的理论方法和应用》


[ Last edited by HarveyWang on 2009-10-11 at 10:22 ]
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
7楼2009-10-11 10:19:45
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salooloo001

至尊木虫 (文坛精英)

考染液:考马斯亮蓝G250或R250 染色 1g, 甲醇450ml溶解,然后加冰乙酸100 ml,水450ml。
可以直接染色(等不及先看看嘛 ^_^),也可以脱水固定后染色,但是最好是薄片的。
然后用脱色液清洗( 乙醇300ml,然后加冰乙酸100 ml,水600ml)。染色轻重自己要摸索掌握好。1-2min即可。

不错
9楼2009-10-12 14:23:19
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