应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助大片段载体构建
汕头大学海洋科学接受调剂
142/2返回列表上一页12
查看: 1188  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
引用回帖:
Originally posted by scelab at 2009-10-8 23:18:
实验有时候就是要试试才知道的。
偶觉得你加的a尾存在问题，是不是没加上？
primer star 是不加A尾的酶吗？你用LA扩也一样啊，即保证保真性，又加了a尾，5kb的片段是有点长了，不过你要是想做后续实验，最终要测 ...

连的时候单独连，转化之前混起来，然后再转化
赞一下 回复此楼
小木虫之有关部门负责人
11楼2009-10-08 23:20:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

plantst5928

铜虫 (小有名气)
你说的LA是什么酶？我没用过，我一般都是先用primer star 把基因扩出来，然后把切角回收的产物再用ex taq去加A的。你用的LA可以把基因扩出来的同时加A 吗？
还有你说的连接比例的问题，我的连接体系是10ul，T载体是0.5ul，目的片段是7.5ul,酶一般0.5ul，5*buffer是2ul.不知您有什么建议？？谢谢指点.
赞一下 回复此楼
12楼2009-10-10 22:30:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 10-11 08:18
背单词中，不经常上网了
LA TAQ 酶，TAKARA公司卖的，pcr结束后会加a的
你可以网搜下说明书。
7.5ul的片段有点多了吧，2-4差不多，酶和buf没问题。
多做几个片段的梯度，会好点。
我认为主要问题是加A那步，从没试过这样加a的做法，没经验~
赞一下(20人) 回复此楼
小木虫之有关部门负责人
13楼2009-10-10 23:47:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bioxixi

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
plantst5928(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+3,VIP+0): 10-11 08:18
首先要保证你的PCR产物末端加a了啊，4700的片段，很可能用的高保真的酶？有的高保真酶是不加a的，首先确认这个吧
然后就连接是PCR产物和载体的浓度比，因为你这个片段很大，好像都比T载体大了吧，加入的量就不能和其他小片段一样了，因为浓度是会影响连接效率的，如果不好把握，可以做几个不同梯度
蓝白斑有时候会有假阳性的，从培养箱拿出来后可以再4度冰箱放几个小时，一些白斑会变蓝的。。。
再试试？祝好运
赞一下(21人) 回复此楼
14楼2009-10-11 08:15:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 plantst5928 的主题更新
142/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 302求调剂 +10 易！? 2026-04-13 10/500 2026-04-13 19:04 by lbsjt
[考研] 材料工程281还有调剂机会吗 +32 xaw. 2026-04-11 33/1650 2026-04-13 15:21 by 张zhihao
[考研] 求调剂 +9 吃口冰激凌 2026-04-07 9/450 2026-04-13 08:46 by 紫曦紫棋
[考研] 药学求调剂 +3 RussHu 2026-04-12 4/200 2026-04-12 17:49 by 陈皮皮
[考研] 322求调剂 +6 123安康 2026-04-12 13/650 2026-04-12 15:51 by 123安康
[考研] 303求调剂 +14 SereinQ 2026-04-10 15/750 2026-04-11 20:43 by 蓝云思雨
[考研] 343求调剂 +9 王国帅 2026-04-10 9/450 2026-04-11 20:31 by dongdian1
[考研] 296求调剂 +14 汪！？！ 2026-04-08 15/750 2026-04-11 20:28 by dongdian1
[考研] 087100初试311求调剂 +4 任雅琴 2026-04-09 4/200 2026-04-11 10:33 by zhq0425
[考研] 机械专硕270求调剂，接受跨专业 +12 老师看看我吧aba 2026-04-09 14/700 2026-04-11 10:21 by laoshidan
[考研] 080100力学316求调剂 +8 L_Hairui 2026-04-07 8/400 2026-04-11 10:00 by zhq0425
[考研] 298求调剂 +13 钉叮咚冬瓜 2026-04-09 13/650 2026-04-10 15:49 by jiajinhpu
[考研] 机械还有还有名额吗？太难了 +6 笑笑袁 2026-04-10 6/300 2026-04-10 11:54 by 高维春
[考研] 314求调剂 +14 weltZeng 2026-04-09 14/700 2026-04-09 23:14 by wolf97
[考研] 070300化学 求调剂 +13 73372112 2026-04-08 13/650 2026-04-09 20:22 by maddjdld
[考研] 机械工程313分找工科调剂 +3 双一流本科机械 2026-04-08 3/150 2026-04-08 20:41 by 土木硕士招生
[考研] 264求调剂 +11 麦小叮当 2026-04-07 11/550 2026-04-08 16:05 by 一只好果子?
[考研] 一志愿211，化学学硕，310分，本科重点双非，求调剂 +10 努力奋斗112 2026-04-07 10/500 2026-04-08 15:01 by screening
[考研] 求调剂 +11 wwwwabcde 2026-04-07 11/550 2026-04-07 23:16 by JourneyLucky
[考研] 机械调剂 +3 zzzbcb 2026-04-07 3/150 2026-04-07 22:19 by hemengdong
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭