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求助大片段载体构建
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我最近在将一个4700bp的基因连进T载体中，可是一直没有成功，现在已经做了3次了。大家有没有什么好的方法可以改进连接效率？ 我的步骤如下： 基因4700bp，用primer star扩增之后，切胶回收目的条带，回收效率还行（取回收产物1ul做模板pcr能扩增出目的条带来），之后加A（8ul底物，30min），连进T载体（promega的），一般4度连接过夜，转化，蓝白斑筛选。第二天板子上能看见白斑，但是挑斑，pcr验证却总是假阳性，提质粒验证，分子量是2500bp左右，肯定是T载体自连了。但是那些白斑是什么啊？ 现在做了3次都是这样，就是连不进去。快郁闷死了，大家有什么好的建议？多谢了!!! |
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