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蚝油生菜

新虫 (小有名气)

[交流] 蛋白无法表达,但其中一段截短蛋白可以表达已有5人参与

全长1900bp的片段无法表达,其中后800bp的片段可以大量表达,其他部分都无法表达,这800bp的片段加上前面250bp的片段之后也无法表达了,有老师知道为什么会有这种情况的吗

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qzhyang2008

捐助贵宾 (正式写手)


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这个不是很正常的情况吗?
但拜拜做截短就是这个目啊。
2楼2023-07-30 06:53:34
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蚝油生菜

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by qzhyang2008 at 2023-07-30 06:53:34
这个不是很正常的情况吗?
但拜拜做截短就是这个目啊。

是做蛋白互作的,就怕这一段没有互作,所以想表达全长

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3楼2023-07-30 14:12:01
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pennchem

专家顾问 (正式写手)


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是怎么确定更长的片段无法表达? 有没有可能全长表达后被水解掉了,所以看不到全长?
行至水穷处,坐看云起时
4楼2023-07-30 18:28:24
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蚝油生菜

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by pennchem at 2023-07-30 18:28:24
是怎么确定更长的片段无法表达? 有没有可能全长表达后被水解掉了,所以看不到全长?

原核表达系统表达真核蛋白的,跑了蛋白胶和WB,请问假如是水解了如何阻止水解呢?

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5楼2023-07-30 23:13:01
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pennchem

专家顾问 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如果是在细胞质内表达,换宿主菌试试看?

如果换宿主菌不work,可以看一下不同domain之间link,有哪些可能酶切水解位点,做一些突变。
行至水穷处,坐看云起时
6楼2023-07-31 10:11:58
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)


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有看下蛋白的结构吗?是不是有跨膜的区域,一般含有跨膜的区域蛋白是没法表达从可溶性蛋白的
7楼2023-08-12 17:26:56
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蚝油生菜

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by yyy0305 at 2023-08-12 17:26:56
有看下蛋白的结构吗?是不是有跨膜的区域,一般含有跨膜的区域蛋白是没法表达从可溶性蛋白的

分析过结构,我只需要表达胞外区域的

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8楼2023-08-13 17:56:15
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刘俊华

铁虫 (初入文坛)


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你好,我这里有一个蛋白交流群500人的,加1195583077 拉你
9楼2023-09-18 14:58:33
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s150535912

新虫 (著名写手)


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我的是做截短,表达出来了全长就离谱

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Keep the eyes blingbling。。。。
10楼2024-02-23 01:24:37
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