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【求助】HPLC出现倒峰，求助
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各位好,我在做液相,用的是荧光检测器,标准品进了后很正常,当进样品时标准品出峰位置会出现倒峰,空白在出峰位置也有倒峰，但随着样品中药物浓度的增加，峰会由倒峰变成正峰，以为是有气泡,又进了同样的样品,可是还是出现了倒峰,请问哪位可以为之解答一下,谢谢 我的流动相是磷酸二氢钾-甲醇60：40，样品是乙酸乙酯提取的 [ Last edited by jw227 on 2009-10-6 at 21:17 ] |
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9楼2009-11-29 11:35:34
472514568
至尊木虫 (职业作家)
小木虫议政大臣兼协办大学士
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2楼2009-10-06 09:56:22
jinlin
至尊木虫 (著名写手)
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karl2100(金币+1,VIP+0):多谢提供！ 10-6 22:46
472514568(金币+1,VIP+0):谢谢回帖！ 11-29 12:43
karl2100(金币+1,VIP+0):多谢提供！ 10-6 22:46
472514568(金币+1,VIP+0):谢谢回帖！ 11-29 12:43
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根据我的经验,基本上是样品溶剂比流动相的UV吸收值低而产生的。比如流动相用n%甲醇,样品用水溶解,溶剂峰肯定为负峰,比n%比例小的溶剂也出现不同程度的负峰.机理为：样品和流动相的协同的吸着作用和竞争的吸着作用。 解决办法： 1.用纯试剂作流动相，用高质量的离子对试剂和缓冲物质配制流动相，各类试剂加合起来应产生最小的倒峰。 2.用流动相溶解样品。可减少到峰的出现几率。 3.进最小体积的样品溶液。一般小于20ul 4.预处理好样品，样品中的杂质会促成倒峰的出现。 5.以上方法仍不能解决问题，则将倒峰作为特殊的干扰峰来处理，即作为特殊的组分来处理。改变色谱条件，使倒峰的位置发生变化避开被干扰的峰。 |
3楼2009-10-06 19:43:07
4楼2009-10-06 19:53:46