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0526401025金虫 (小有名气)
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多克隆抗体的制备
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| 本人正在查找关于抗体制备kang与方面的一些资料，想知道如果制备多克隆抗体一个周期大约需要多长的时间（从抗原的制备开始，抗原为基因重组抗原或病毒表面抗原). |
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多克隆抗体制备
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（一）抗原制备 Ig是免疫球蛋白，对异种动物而言，是良好的抗原物质。可以刺激异种动物产生抗Ig血清，经适当提取后，产生抗Ig抗体，又叫第二抗体或抗抗体。在多数的间接标记反应中，均需制备抗Ig抗体。 （二）材料与试剂 1．提取的动物Ig 2．弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂 3．青霉素和链霉素 4．实验动物 兔 5．其它材料及试剂 （三）操作方法 1．免疫方法 可以采用以下各种方法之一进行免疫。 （1）淋巴结注射法：①在兔的两后足跖部皮下（或皮内）注射活卡介苗50mg（每侧约0.30ml）。7～10天后，兔跖及腘肌淋巴结肿大；②于肿大的两侧淋巴结内各注射加有完全佐剂的IgG乳化抗原0.50ml(含IgG 5mg/ml、青霉素1 000U/ml、链霉素1 000μg/ml)；③必要时，14天后，重复步骤②一次；④再过7天后，于两侧淋巴结内各注射加有完全佐剂的IgG乳化抗原0.50ml（含IgG5mg/ml、青霉素1 000U/ml、链霉素1 000μg/ml）；⑤5～7天后，耳静脉采血。测定血清效价。 （2）皮下多点注射法：①家兔两侧掌（跖内各注射含有完全佐剂抗原0.10ml（IgG含量5mg/ml）；②7～10天后，脊柱两侧多点（颈、胸、腰椎各两点、共6点）皮下注射含不完全佐剂的抗原，每点0.50ml；③7～10天后，脊柱两侧重复注射一次；④7～10天后试血。不合格者重复步骤③。 （3）多途径联合注射法：①两侧掌（跖）内侧皮下注射含完全佐剂抗原0.50ml（IgG量为5mg/ml）；②14天后，多点皮下注射含有不完全佐剂抗原；③7天后，耳静脉注射不含佐剂的抗原2ml；④测定血清抗体效价，不合格者重复步骤③，并适当递增IgG量。 2．效价测定 采用琼脂扩散法。 ⑴ 将血清倍比稀释，加入外周孔。 ⑵ 中间孔加动物Ig。 ⑶ 37℃湿盒琼扩24小时，观察结果。 （四）结果判定 1．抗Ig的效价测定 琼脂扩散效价达1﹕16或1﹕32者为合格。 2．纯度鉴定 采用琼扩法。中间孔加抗Ig血清，外周孔加Ig和标准品Ig。在抗Ig与Ig以及标准品Ig均出现一条沉淀线，且这两条沉淀线相互融合者，说明提取的Ig是纯的。 |
4楼2009-10-05 19:05:19
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