| 查看: 250 | 回复: 4 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
0526401025金虫 (小有名气)
|
[交流]
多克隆抗体的制备
|
||
| 本人正在查找关于抗体制备kang与方面的一些资料，想知道如果制备多克隆抗体一个周期大约需要多长的时间（从抗原的制备开始，抗原为基因重组抗原或病毒表面抗原). |
回复此楼» 猜你喜欢
全日制（定向）博士
已经有5人回复
-
假如你的研究生提出不合理要求
已经有10人回复
-
萌生出自己或许不适合搞科研的想法，现在跑or等等看？
已经有4人回复
-
Materials Today Chemistry审稿周期
已经有4人回复
-
参与限项
已经有3人回复
-
实验室接单子
已经有4人回复
-
对氯苯硼酸纯化
已经有3人回复
-
求助:我三月中下旬出站，青基依托单位怎么办？
已经有12人回复
-
所感
已经有4人回复
-
要不要辞职读博？
已经有7人回复
pengyao627
捐助贵宾 (文坛精英)
忽忽家族之忽忽然
- 应助: 41 (小学生)
- 贵宾: 0.055
- 金币: 2428.6
- 散金: 7366
- 红花: 16
- 沙发: 38
- 帖子: 22544
- 在线: 371.4小时
- 虫号: 850247
- 注册: 2009-09-17
- 专业: 交通工程
2楼2009-10-05 18:46:47
simi753
木虫 (著名写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1875.4
- 散金: 487
- 红花: 4
- 帖子: 1028
- 在线: 111.8小时
- 虫号: 547906
- 注册: 2008-04-18
- 性别: GG
- 专业: 药物学其他科学问题
3楼2009-10-05 18:58:13
jinlin
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 22051.6
- 红花: 1
- 帖子: 1629
- 在线: 44.2小时
- 虫号: 46632
- 注册: 2004-05-29
- 专业: 冠状动脉性心脏病
多克隆抗体制备
★ ★ ★ ★
0526401025(金币+4,VIP+0): 10-8 15:39
0526401025(金币+4,VIP+0): 10-8 15:39
|
（一）抗原制备 Ig是免疫球蛋白，对异种动物而言，是良好的抗原物质。可以刺激异种动物产生抗Ig血清，经适当提取后，产生抗Ig抗体，又叫第二抗体或抗抗体。在多数的间接标记反应中，均需制备抗Ig抗体。 （二）材料与试剂 1．提取的动物Ig 2．弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂 3．青霉素和链霉素 4．实验动物 兔 5．其它材料及试剂 （三）操作方法 1．免疫方法 可以采用以下各种方法之一进行免疫。 （1）淋巴结注射法：①在兔的两后足跖部皮下（或皮内）注射活卡介苗50mg（每侧约0.30ml）。7～10天后，兔跖及腘肌淋巴结肿大；②于肿大的两侧淋巴结内各注射加有完全佐剂的IgG乳化抗原0.50ml(含IgG 5mg/ml、青霉素1 000U/ml、链霉素1 000μg/ml)；③必要时，14天后，重复步骤②一次；④再过7天后，于两侧淋巴结内各注射加有完全佐剂的IgG乳化抗原0.50ml（含IgG5mg/ml、青霉素1 000U/ml、链霉素1 000μg/ml）；⑤5～7天后，耳静脉采血。测定血清效价。 （2）皮下多点注射法：①家兔两侧掌（跖内各注射含有完全佐剂抗原0.10ml（IgG含量5mg/ml）；②7～10天后，脊柱两侧多点（颈、胸、腰椎各两点、共6点）皮下注射含不完全佐剂的抗原，每点0.50ml；③7～10天后，脊柱两侧重复注射一次；④7～10天后试血。不合格者重复步骤③。 （3）多途径联合注射法：①两侧掌（跖）内侧皮下注射含完全佐剂抗原0.50ml（IgG量为5mg/ml）；②14天后，多点皮下注射含有不完全佐剂抗原；③7天后，耳静脉注射不含佐剂的抗原2ml；④测定血清抗体效价，不合格者重复步骤③，并适当递增IgG量。 2．效价测定 采用琼脂扩散法。 ⑴ 将血清倍比稀释，加入外周孔。 ⑵ 中间孔加动物Ig。 ⑶ 37℃湿盒琼扩24小时，观察结果。 （四）结果判定 1．抗Ig的效价测定 琼脂扩散效价达1﹕16或1﹕32者为合格。 2．纯度鉴定 采用琼扩法。中间孔加抗Ig血清，外周孔加Ig和标准品Ig。在抗Ig与Ig以及标准品Ig均出现一条沉淀线，且这两条沉淀线相互融合者，说明提取的Ig是纯的。 |
4楼2009-10-05 19:05:19
539669488
金虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 662.7
- 散金: 112
- 帖子: 1130
- 在线: 113.6小时
- 虫号: 660086
- 注册: 2008-11-22
- 专业: 生化分析及生物传感
5楼2009-10-05 21:16:28