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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白质纯化之凝胶过滤层析损失多
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onetwo哥

新虫 (小有名气)

[交流] 蛋白质纯化之凝胶过滤层析损失多 已有3人参与

我做蛋白质晶体结晶，因此需要高纯度的蛋白质样品。一般会依次经过Ni柱亲和层析，离子交换层析和凝胶过滤层析。最近我发现，样品在过完凝胶过滤层析后损失了很多，请问大家可能是哪里出问题了呢？

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1楼 2023-06-18 10:56:27
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刘洪振

铜虫 (小有名气)
★
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是需要提纯吗，可以用离心浓缩仪

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长恨人心不如水，等闲平地起波澜
2楼2023-06-18 18:04:04
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onetwo哥

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 刘洪振 at 2023-06-18 18:04:04
是需要提纯吗，可以用离心浓缩仪

不仅仅是提高浓度，还需要去除其他杂蛋白

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3楼2023-06-18 23:32:36
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刘洪振

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
那得先用其他溶剂萃取下

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长恨人心不如水，等闲平地起波澜
4楼2023-06-19 08:54:37
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onetwo哥

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 刘洪振 at 2023-06-19 08:54:37
那得先用其他溶剂萃取下

蛋白也能萃取？

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5楼2023-06-19 09:14:39
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jieqi0_0

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是要提供浓缩管离心浓缩，然后再inject到凝胶过滤层析进行纯化吗？这样的话可能会在浓缩管这一步损失10-30%蛋白含量
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既出发，必到达
6楼2023-10-09 16:33:21
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onetwo哥

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 南工齐杰 at 2023-10-09 16:33:21
是要提供浓缩管离心浓缩，然后再inject到凝胶过滤层析进行纯化吗？这样的话可能会在浓缩管这一步损失10-30%蛋白含量

是的，浓缩之后再上样

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7楼2023-10-10 10:35:48
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纯化扫地僧

新虫 (小有名气)
★
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如果分子筛和以前柱行为不一样，该重装柱子了
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做简单的纯化，做高纯度的纯化
8楼2023-10-13 09:12:30
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