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onetwo哥

新虫 (小有名气)

[交流] 蛋白质纯化之凝胶过滤层析损失多 已有3人参与

我做蛋白质晶体结晶,因此需要高纯度的蛋白质样品。一般会依次经过Ni柱亲和层析,离子交换层析和凝胶过滤层析。最近我发现,样品在过完凝胶过滤层析后损失了很多,请问大家可能是哪里出问题了呢?

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刘洪振

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
是需要提纯吗,可以用离心浓缩仪

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长恨人心不如水,等闲平地起波澜
2楼2023-06-18 18:04:04
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onetwo哥

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 刘洪振 at 2023-06-18 18:04:04
是需要提纯吗,可以用离心浓缩仪

不仅仅是提高浓度,还需要去除其他杂蛋白

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3楼2023-06-18 23:32:36
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刘洪振

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
那得先用其他溶剂萃取下

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长恨人心不如水,等闲平地起波澜
4楼2023-06-19 08:54:37
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onetwo哥

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 刘洪振 at 2023-06-19 08:54:37
那得先用其他溶剂萃取下

蛋白也能萃取?

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5楼2023-06-19 09:14:39
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jieqi0_0

铁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
是要提供浓缩管离心浓缩,然后再inject到凝胶过滤层析进行纯化吗?这样的话可能会在浓缩管这一步损失10-30%蛋白含量
既出发,必到达
6楼2023-10-09 16:33:21
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onetwo哥

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 南工齐杰 at 2023-10-09 16:33:21
是要提供浓缩管离心浓缩,然后再inject到凝胶过滤层析进行纯化吗?这样的话可能会在浓缩管这一步损失10-30%蛋白含量

是的,浓缩之后再上样

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7楼2023-10-10 10:35:48
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纯化扫地僧

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如果分子筛和以前柱行为不一样,该重装柱子了
做简单的纯化,做高纯度的纯化
8楼2023-10-13 09:12:30
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