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nicole1124

新虫 (小有名气)

[交流] 胶回收的残余乙醇会影响连接效率吗?

加了wash buffer后离了30S,然后忘了空离2分钟,就直接加了elution buffer,后面连接反应10ul 体系,这个片段加了4ul,会不会影响连接酶活性啊?怎么去除里面的乙醇呢,水浴蒸发一下可以吗?
高手帮帮忙吧,谢谢了~

[ Last edited by amisking on 2009-10-3 at 18:21 ]
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gastrodia

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
nicole1124(金币+2,VIP+0): 10-3 10:01
amisking(金币+2,VIP+0): 10-3 17:07
会影响,你可以尝试一下4度连接过夜,再转化,如果不行,就重做吧
这个片段加4ul,为什么10ul的体系中重要的是载体和片段的摩尔比要合适。
2楼2009-10-03 16:51:16
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gastrodia

金虫 (正式写手)

★ ★
nicole1124(金币+1,VIP+0): 10-3 10:01
amisking(金币+1,VIP+0): 10-3 17:07
要偷懒也成,直接挥发干燥后,使用真空干燥仪,很快的,干燥后重新加同体积的ddH2O溶解即可
3楼2009-10-03 16:52:27
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nicole1124

新虫 (小有名气)

这么复杂哦?一定要完全干燥才能挥发啊。。。
4楼2009-10-03 17:22:09
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pph0259

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by nicole1124 at 2009-10-3 17:22:
这么复杂哦?一定要完全干燥才能挥发啊。。。

废话!
5楼2009-10-03 23:04:09
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speculiar

银虫 (小有名气)

会的 重做吧
6楼2009-10-04 00:43:22
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水过无恒

铜虫 (正式写手)

★ ★
nicole1124(金币+2,VIP+0): 10-6 07:35
不考虑乙醇对酶活的影响,就凭一点:不空离得话你加15ul的elution buffer最后至少有30ul的回收液吧,你说有没有影响
DNA片段不浓也很难做出来的哦~~

小MM,做事要细心
7楼2009-10-04 10:13:06
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nicole1124

新虫 (小有名气)

吼吼,来汇报一下结果。那天就直接连接了两个小时,还是长了几十颗菌。一切顺利,还是谢谢大家了~
8楼2009-10-06 14:35:10
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xianzhao

会有影响!
9楼2009-10-06 19:08:24
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qqsvery

木虫 (著名写手)

谁能告诉我乙醇在这里有什么影响?是做rna吗?
谎言和真实在河边洗澡,谎言先洗好,穿走了真实的衣服,真实却不肯穿谎言的衣服。后来人们眼里只有穿着真实衣服的谎言,却很难接受赤裸裸的真实。
10楼2009-10-06 21:49:16
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