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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 胶回收的残余乙醇会影响连接效率吗？
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nicole1124

新虫 (小有名气)

[交流] 胶回收的残余乙醇会影响连接效率吗？

加了wash buffer后离了30S，然后忘了空离2分钟，就直接加了elution buffer，后面连接反应10ul 体系，这个片段加了4ul，会不会影响连接酶活性啊？怎么去除里面的乙醇呢，水浴蒸发一下可以吗？
高手帮帮忙吧，谢谢了~

[ Last edited by amisking on 2009-10-3 at 18:21 ]
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1楼 2009-10-03 16:34:53
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
nicole1124(金币+2,VIP+0): 10-3 10:01
amisking(金币+2,VIP+0): 10-3 17:07
会影响，你可以尝试一下4度连接过夜，再转化，如果不行，就重做吧
这个片段加4ul，为什么10ul的体系中重要的是载体和片段的摩尔比要合适。
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2楼2009-10-03 16:51:16
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★ ★
nicole1124(金币+1,VIP+0): 10-3 10:01
amisking(金币+1,VIP+0): 10-3 17:07
要偷懒也成，直接挥发干燥后，使用真空干燥仪，很快的，干燥后重新加同体积的ddH2O溶解即可
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3楼2009-10-03 16:52:27
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nicole1124

新虫 (小有名气)
这么复杂哦？一定要完全干燥才能挥发啊。。。
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4楼2009-10-03 17:22:09
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pph0259

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by nicole1124 at 2009-10-3 17:22:
这么复杂哦？一定要完全干燥才能挥发啊。。。

废话！
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5楼2009-10-03 23:04:09
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speculiar

银虫 (小有名气)
会的 重做吧
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6楼2009-10-04 00:43:22
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水过无恒

铜虫 (正式写手)
★ ★
nicole1124(金币+2,VIP+0): 10-6 07:35
不考虑乙醇对酶活的影响，就凭一点：不空离得话你加15ul的elution buffer最后至少有30ul的回收液吧，你说有没有影响
DNA片段不浓也很难做出来的哦~~

小MM，做事要细心
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7楼2009-10-04 10:13:06
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nicole1124

新虫 (小有名气)
吼吼，来汇报一下结果。那天就直接连接了两个小时，还是长了几十颗菌。一切顺利，还是谢谢大家了~
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8楼2009-10-06 14:35:10
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xianzhao

会有影响！
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9楼2009-10-06 19:08:24
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qqsvery

木虫 (著名写手)
谁能告诉我乙醇在这里有什么影响？是做rna吗？
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谎言和真实在河边洗澡，谎言先洗好，穿走了真实的衣服，真实却不肯穿谎言的衣服。后来人们眼里只有穿着真实衣服的谎言，却很难接受赤裸裸的真实。
10楼2009-10-06 21:49:16
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