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金虫 (正式写手)

[交流] sma1酶切

sma1酶切后可以保存多长时间，DNA片段与载体连接后又怎么保存，保存时间可以多长？如果没有转化完可以保存连接产物吗？

1楼 2009-10-03 12:15:29

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铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+3,VIP+0): 10-3 14:58
mzqpony(金币+3,VIP+0):谢谢 10-3 15:17

平端理论上比黏端稳定性强，放在4度可以久一点，但是没有做过具体实验，所以建议还是不要超过一周
连接物可以放在四度，没有什么问题
当然也不要放太久，毕竟会缓慢降解，多多少少会混点DNase的
最好还是一周内做完吧
个人感觉黏端就需要两三天内搞定

2楼2009-10-03 14:46:16

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铜虫 (小有名气)

★
mzqpony(金币+1,VIP+0):Thanks 10-4 18:52

酶切过后最好做个纯化
连接产物要要转化宿主菌（一般是大肠杆菌），扩增
这样才能达到保存的目的
如果不转化，建议放在-20度以上，不超过半年

3楼2009-10-04 10:08:35

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银虫 (小有名气)

★
mzqpony(金币+1,VIP+0):Thanks 10-4 18:52

Sal酶切后放-20°可以放上几个月。因为我的质粒Sal切后放-20°放了两个月后做连接，也能连接上。连接完后最好尽快做转化。连接时间太长效果不好。我们一般连36个小时效果很好。当然不同的菌也不一样。

4楼2009-10-04 11:45:22

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