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孙韦地

新虫 (初入文坛)

[交流] 转化子假阳性 已有3人参与

自己PCR加his标签，双酶切连接之后热激转化，转化子假阳性是为什么呀？转化之后测序序列比对和目的片段不匹配，和载体匹配，说明载体和片段没连上，但是菌P验证的时候电泳胶上面有明亮的条带，用的感受态细胞是MC1061，载体是PNZ8148
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1楼 2023-05-11 18:07:43
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ffplant

新虫 (小有名气)
★
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转化后涂平板挑菌做的吗？有可能是没连上但是你的平板表面有散落的目的片段，导致菌检扩增有条带但测序没有目的片段

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2楼2023-05-12 11:01:11
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1521894473

新虫 (初入文坛)
★
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pnz8148载体转化到MC1061后，我的涂板不长菌（25μg/ml、10μg/ml氯霉素固体平板），转化到DH5α也不长，但是点涂还有明显亮的条带
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3楼2023-11-16 14:31:50
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2019013672

新虫 (初入文坛)
★
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his标签比较小吧，你确定菌p是his不是引物二聚体？有把菌p的进行胶回收送测看看嘛？确定是his的基因？你都送测没有检测到his的基因，his基因怎么可能单独存在菌里面，也许你没有连his的菌说不定也能p出来条带呢
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4楼2025-04-26 16:02:59
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