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guyue2885

银虫 (正式写手)

[交流] 菌液PCR假阳性的多么

蓝白斑筛选后,菌液PCR,后直接对阳性结果进行测序,不做酶切,可行否?菌液PCR假阳性的多么?
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mascotte

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
涂板时板上会含有未转入外源DNA的Ecoli.;转入外源DNA的Ecoli;未转入Ecoli的外源DNA。菌落或菌液PCR的时候因为模板(菌落或菌液)很可能含有做transformation时加入的ligation DNA,如果这些DNA很多的话,经过30多个循环扩增出阳性结果很正常,所以一定要经过酶切鉴定。
10楼2009-09-30 23:32:48
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查看全部 13 个回答

kxjh

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 9-30 13:23
菌液PCR假阳性是挺多的,最好酶切后看到阳性目的片段再送去测序。不然耽误时间也浪费钱。
2楼2009-09-30 09:35:31
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十比

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
楼上说的很对,假的太多
3楼2009-09-30 11:27:36
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mcheng

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
一般来说菌落PCR假阳性是挺多的,不过你是在蓝白筛选的基础上再做菌落PCR我个人认为可靠性还是比较高的。
6楼2009-09-30 16:10:27
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