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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 救命.....蛋白不表达
汕头大学海洋科学接受调剂
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lxiaofeng

铁虫 (初入文坛)

[交流] 救命.....蛋白不表达

我是在酿酒酵母里表达一个比较特殊的蛋白，开始是想用信号肽把他分泌出来的，不成功；后来干脆就胞内表达了，但还是不成功，现在万分紧急，请教请教！！！！万分感激！！！！！    我是广东某高校的，如果有广州的同行当面指教的话，定毕酬谢！！！！
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1楼 2009-09-29 19:27:45
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lxiaofeng

铁虫 (初入文坛)
我的手机是 15918479122（广州卡），定毕酬谢！！
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2楼2009-09-29 19:36:03
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xiangao

金虫 (正式写手)
★
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难道是表达某种酶？？ 胞外表达有点难，现在都在做表面展示吧
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3楼2009-09-29 22:00:50
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★ ★ ★ ★
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amisking(金币+3,VIP+0): 10-8 15:49
楼主我给你说个我所经历的事，
我的一个同学也是酵母表达一个生长激素类的物质，
他的表达用SDS-PAGE根本看不到的，只能用免疫法鉴定。
他优化条件做了2年啊，博士的大好时光就这样过去了，然后不得不换课题，

所以，表达不好，很可能就是上游构建的不好，
只能在质粒或菌株方面改造一下，才能在优化上再花一定的时间！

所以我建议楼主，你如果用了半年时间优化，还得不到好的结果，
一定不要一条道走到黑啊~~~
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
4楼2009-09-30 10:03:15
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lxiaofeng

铁虫 (初入文坛)
谢谢........我也做了2年了，也是用SDS-PAGE来检测，还是没法确定我的蛋白条带（考染），想做Western Blot但没抗体，请问大家有什么好建议吗？？？？
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5楼2009-09-30 10:20:54
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
有些蛋白是无法表达的
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6楼2009-09-30 11:16:10
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caicaiyy

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
表达载体构建有问题，在大肠杆菌表达试一下，看可表达得出来。
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7楼2009-10-08 11:11:33
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0): 10-8 15:49
表达不好做啊，想想就知道了
每种微生物都有特定的代谢网络和能量机制，把没用的东西呼呼的分泌那么多，肯定得涉及到很多基础的理论。
估计你要搞好了，可以拼拼NOBEL了
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小木虫之有关部门负责人
8楼2009-10-08 14:47:21
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beibei9535

荣誉版主 (职业作家)

晕晕小版主~ 姑娘你好！

优秀版主优秀版主

同问

★
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引用回帖:
Originally posted by lxiaofeng at 2009-9-29 19:27:
我是在酿酒酵母里表达一个比较特殊的蛋白，开始是想用信号肽把他分泌出来的，不成功；后来干脆就胞内表达了，但还是不成功，现在万分紧急，请教请教！！！！万分感激！！！！！    我是广东某高校的，如果有广州的 ...

我们学校也在做这个，你可以过来问问，华工生物学院，在大学城。
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最好的年龄是，那一天，终于知道并且坚信自己有多好，不是虚张，不是夸浮，不是众人捧，是内心明明澈澈知道：是的，我就是这么好。
9楼2009-10-08 15:45:01
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zier1011

木虫 (著名写手)
我硕士时做的就是纤维素酶在酿酒酵母中的表达，当时做到蛋白纯化，不知道楼主没有表达出来是哪里出了问题，你确定重组质粒构建没问题，重组质粒转化没问题，转化的质粒能保证没丢失？
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花还香香的
10楼2009-10-12 13:33:55
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