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lxiaofeng

铁虫 (初入文坛)

[交流] 救命.....蛋白不表达

我是在酿酒酵母里表达一个比较特殊的蛋白,开始是想用信号肽把他分泌出来的,不成功;后来干脆就胞内表达了,但还是不成功,现在万分紧急,请教请教!!!!万分感激!!!!!    我是广东某高校的,如果有广州的同行当面指教的话,定毕酬谢!!!!
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lxiaofeng

铁虫 (初入文坛)

我的手机是 15918479122(广州卡),定毕酬谢!!
2楼2009-09-29 19:36:03
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xiangao

金虫 (正式写手)


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难道是表达某种酶?? 胞外表达有点难,现在都在做表面展示吧
3楼2009-09-29 22:00:50
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

★ ★ ★ ★
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amisking(金币+3,VIP+0): 10-8 15:49
楼主我给你说个我所经历的事,
我的一个同学也是酵母表达一个生长激素类的物质,
他的表达用SDS-PAGE根本看不到的,只能用免疫法鉴定。
他优化条件做了2年啊,博士的大好时光就这样过去了,然后不得不换课题,

所以,表达不好,很可能就是上游构建的不好,
只能在质粒或菌株方面改造一下,才能在优化上再花一定的时间!

所以我建议楼主,你如果用了半年时间优化,还得不到好的结果,
一定不要一条道走到黑啊~~~
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
4楼2009-09-30 10:03:15
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lxiaofeng

铁虫 (初入文坛)

谢谢........我也做了2年了,也是用SDS-PAGE来检测,还是没法确定我的蛋白条带(考染),想做Western Blot但没抗体,请问大家有什么好建议吗????
5楼2009-09-30 10:20:54
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)

有些蛋白是无法表达的
6楼2009-09-30 11:16:10
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caicaiyy

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
表达载体构建有问题,在大肠杆菌表达试一下,看可表达得出来。
7楼2009-10-08 11:11:33
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0): 10-8 15:49
表达不好做啊,想想就知道了
每种微生物都有特定的代谢网络和能量机制,把没用的东西呼呼的分泌那么多,肯定得涉及到很多基础的理论。
估计你要搞好了,可以拼拼NOBEL了
小木虫之有关部门负责人
8楼2009-10-08 14:47:21
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beibei9535

荣誉版主 (职业作家)

晕晕小版主~ 姑娘你好!

优秀版主优秀版主

同问


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by lxiaofeng at 2009-9-29 19:27:
我是在酿酒酵母里表达一个比较特殊的蛋白,开始是想用信号肽把他分泌出来的,不成功;后来干脆就胞内表达了,但还是不成功,现在万分紧急,请教请教!!!!万分感激!!!!!    我是广东某高校的,如果有广州的 ...

我们学校也在做这个,你可以过来问问,华工生物学院,在大学城。
最好的年龄是,那一天,终于知道并且坚信自己有多好,不是虚张,不是夸浮,不是众人捧,是内心明明澈澈知道:是的,我就是这么好。
9楼2009-10-08 15:45:01
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zier1011

木虫 (著名写手)

我硕士时做的就是纤维素酶在酿酒酵母中的表达,当时做到蛋白纯化,不知道楼主没有表达出来是哪里出了问题,你确定重组质粒构建没问题,重组质粒转化没问题,转化的质粒能保证没丢失?
花还香香的
10楼2009-10-12 13:33:55
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