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汕头大学海洋科学接受调剂
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superman.6

新虫 (小有名气)

[求助] 测序双峰问题 已有2人参与

菌落pcr(引物27f/1492r),前后两次测序结果都是正向正常,反向重叠峰。第一次出现这种情况后,我把我的菌种继续纯化了,但是第二次还是这样的结果,不知道什么原因了

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superman.6

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by KM石头 at 2023-04-26 10:18:22
楼主这个是测16s吧,你测序的引物是自己送到还是使用测序公司的,如果是自己的建议检查自己的引物是否有问题(是否污染);第二种方法,建议将PCR产物连到T载体上,再送质粒去测序,干扰会少很多

好的,谢谢。我想再问问,出现一端正常,一端重叠峰的情况,可以排除我的dna模板不纯的问题吗

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4楼2023-04-26 10:35:34
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查看全部 6 个回答

Glenice Y

新虫 (正式写手)

为什么不送质粒测序,还是这个比较特殊

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2楼2023-04-25 23:58:10
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KM石头

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主这个是测16s吧,你测序的引物是自己送到还是使用测序公司的,如果是自己的建议检查自己的引物是否有问题(是否污染);第二种方法,建议将PCR产物连到T载体上,再送质粒去测序,干扰会少很多
3楼2023-04-26 10:18:22
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shuaibia6

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有一种情况可以解释,就是你的菌落不纯,打个比方就是你的菌有2种,一种是A链正常的,一种是A链缺失的,它们的互补链B链都是正常的。这样你其中一条引物测序测的是A链,所以测序正常,另一条链测的是B链,因为存在2种型,一个正常一种缺失,所以测序结果是双峰。这种情况我建议你摇菌点单菌落,再提取单菌落再测序就没问题了。
5楼2023-04-27 16:55:10
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