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wh7690703

木虫 (正式写手)

[交流] BamHI和HindIII双酶切效率如何?

求助:本人欲打算采用pET-28作为表达载体,酶切位点选择BamHI和HindIII或NcoI和HindIII。请问这2种选择好不好?双切及连接效率如何?
注:BamHI和HindIII相隔不到20个碱基,NcoI和HindIII相隔的较远。
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bioxixi

木虫 (著名写手)


wh7690703(金币+1,VIP+0):能具体些吗?双切和链接效率高吗?我的目的是构建突变库。 9-28 19:09
远了较好,其实20个碱基也够了
酶切效率都不错,看看只要缓冲液通用就行了 我觉得就看哪两个的缓冲液匹配率高了,别没什么问题 pET-28也是很成熟的载体
祝顺利
3楼2009-09-28 14:43:30
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

可以的,以前实验室有人用过。
2楼2009-09-28 14:17:24
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


wh7690703(金币+1,VIP+0):谢谢 9-29 10:55
都可以,不过感觉前面的相隔比较近,可能对酶切效率有一定的影响。NcoI和HindIII可以,只要不要让NcoI影响ORF就行了。
6楼2009-09-28 21:54:03
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bioxixi

木虫 (著名写手)


wh7690703(金币+1,VIP+0):哪个公司卖高效连接液? 9-29 10:56
记忆中这三个酶的酶切效率都挺高的,连接效率就要看你用什么连接酶了,可以买高效连接液,反应时间短效率也高。
7楼2009-09-29 08:23:46
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