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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » BamHI和HindIII双酶切效率如何？
汕头大学海洋科学接受调剂
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wh7690703

木虫 (正式写手)

[交流] BamHI和HindIII双酶切效率如何？

求助：本人欲打算采用pET-28作为表达载体，酶切位点选择BamHI和HindIII或NcoI和HindIII。请问这2种选择好不好？双切及连接效率如何？
注：BamHI和HindIII相隔不到20个碱基，NcoI和HindIII相隔的较远。
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1楼 2009-09-28 14:03:42
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
可以的，以前实验室有人用过。
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2楼2009-09-28 14:17:24
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bioxixi

木虫 (著名写手)
★
wh7690703(金币+1,VIP+0):能具体些吗？双切和链接效率高吗？我的目的是构建突变库。 9-28 19:09
远了较好，其实20个碱基也够了
酶切效率都不错，看看只要缓冲液通用就行了 我觉得就看哪两个的缓冲液匹配率高了，别没什么问题 pET-28也是很成熟的载体
祝顺利
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3楼2009-09-28 14:43:30
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司马诸葛

木虫 (正式写手)
同意楼上
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4楼2009-09-28 18:36:40
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wh7690703

木虫 (正式写手)
高手帮忙啊
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5楼2009-09-28 21:39:53
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
wh7690703(金币+1,VIP+0):谢谢 9-29 10:55
都可以，不过感觉前面的相隔比较近，可能对酶切效率有一定的影响。NcoI和HindIII可以，只要不要让NcoI影响ORF就行了。
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6楼2009-09-28 21:54:03
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bioxixi

木虫 (著名写手)
★
wh7690703(金币+1,VIP+0):哪个公司卖高效连接液？ 9-29 10:56
记忆中这三个酶的酶切效率都挺高的，连接效率就要看你用什么连接酶了，可以买高效连接液，反应时间短效率也高。
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7楼2009-09-29 08:23:46
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jlc0225

至尊木虫 (著名写手)
★
wh7690703(金币+1,VIP+0):那么应如何避免呢？ 9-29 10:56
好像Nco 1的GC含量很高，设计引物不好平衡。
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开始新的学习！
8楼2009-09-29 10:11:42
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
保护碱基加AT。
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9楼2009-09-29 11:34:43
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seahow

木虫 (著名写手)
★
wh7690703(金币+1,VIP+0):加几个为好呢？哪2个内切酶效率低？ 9-29 12:52
效率很低，注意保护碱基。 最好多几个， goooood lucky
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10楼2009-09-29 11:38:04
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