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陌上花~

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[求助] 显影蛋白条带重复前浅后深

WB实验中，每块胶上两组重复，第一组出的条带较弱，第二组重复条带偏强，是什么原因呢？换了转膜夹子和滤纸也是如此？
谢谢

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1楼 2023-04-06 00:13:55

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十点零

新虫 (小有名气)

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会不会是你样品还没有化完，或者没有充分混匀？还有就是两次加样的时候有没有注意枪头残留，SDS的上样缓冲液很容易挂壁的。

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2楼2023-04-07 07:03:38

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陌上花~

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 十点零 at 2023-04-07 07:03:38
会不会是你样品还没有化完，或者没有充分混匀？还有就是两次加样的时候有没有注意枪头残留，SDS的上样缓冲液很容易挂壁的。

谢谢亲，样品化好了，12000rpm瞬离后取上清，之前制备样品变性之前是12000rpm,离心10min后取的上清进行的蛋白变性；
枪头残留的话，应该不太会，用的是去酶的枪头（质量会好一些），都是第二组重复上样蛋白条带强，不过亲说的，下次上样我会注意下。
亲，转膜的时候胶一直是横着放的，胶竖着转膜可以吗（湿转法），感谢

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3楼2023-04-07 08:52:51

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