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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 通过引物在质粒上插入Flag tag，为什么老是少插入一部分？
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袁黎明

新虫 (小有名气)

[求助] 通过引物在质粒上插入Flag tag，为什么老是少插入一部分？

通过引物在质粒上插入Flag tag，为什么老是少插入一部分？
通过引物在质粒目的基因后插入Flag tag，设flag序列为123426，互补为1'2'3'4'2'6'
正向引物：456+同源区
反向引物：3'2'1'+同源区
正常正向会PCR出456+质粒+123，导入E. coli重连成  质粒+123456
PCR结果出现为质粒+126
Why?
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1楼 2023-04-05 01:28:47
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YU_DG

木虫 (正式写手)
在转入大肠杆菌后修复的过程中会导致序列出现问题，建议做正向引物 ：  123456+同源臂；反向引物654321+同源臂扩增；循环数不要太多，建议15个
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2楼2023-05-04 20:06:35
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