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袁黎明

新虫 (小有名气)

[求助] 通过引物在质粒上插入Flag tag,为什么老是少插入一部分?

通过引物在质粒上插入Flag tag,为什么老是少插入一部分?
通过引物在质粒目的基因后插入Flag tag,设flag序列为123426,互补为1'2'3'4'2'6'
正向引物:456+同源区
反向引物:3'2'1'+同源区
正常正向会PCR出456+质粒+123,导入E. coli重连成  质粒+123456
PCR结果出现为质粒+126
Why?
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YU_DG

木虫 (正式写手)

在转入大肠杆菌后修复的过程中会导致序列出现问题,建议做正向引物 :  123456+同源臂;反向引物654321+同源臂扩增;循环数不要太多,建议15个
2楼2023-05-04 20:06:35
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