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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 不同抗体孵育后，western 电泳条带总是出现在同一位置
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呀薯条

金虫 (小有名气)

[交流] 不同抗体孵育后，western 电泳条带总是出现在同一位置 已有2人参与

求助各位大神，最近不知道什么原因，使用不同的一抗，在相同位置都会出现条带，而应该出现的位置又没有东西。封闭液、一抗、二抗都重新配置过，还是不行
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1楼 2023-03-30 15:16:18
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呀薯条

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by qzhyang2008 at 2023-04-03 08:59:11
很明显。抗体没有问题。而是抗原蛋白发生片段降解，不同的抗体显色条带都应该是在你预期出现目的条带的下面，对吗？

我试过几种不同的类型的蛋白，小鼠组织蛋白、细胞蛋白，自己提的还是别人提的，同一批跑下来，孵育同一种抗体，还是这个结果，43-55KD中间有个很明显的杂带，目的蛋白没有出现
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4楼2023-05-04 08:52:20
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呀薯条

金虫 (小有名气)
我有相关western图片，可是不知道该怎么上传
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2楼2023-03-30 15:41:57
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qzhyang2008

捐助贵宾 (正式写手)
★
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很明显。抗体没有问题。而是抗原蛋白发生片段降解，不同的抗体显色条带都应该是在你预期出现目的条带的下面，对吗？
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3楼2023-04-03 08:59:11
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YU_DG

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by 呀薯条 at 2023-05-04 08:52:20
我试过几种不同的类型的蛋白，小鼠组织蛋白、细胞蛋白，自己提的还是别人提的，同一批跑下来，孵育同一种抗体，还是这个结果，43-55KD中间有个很明显的杂带，目的蛋白没有出现...

只加二抗有此条带吗？如果不加抗体，只加二抗还有该条带的话，可能是样品中有与二抗结合的蛋白；如果目的蛋白比55kd小的话，是不是目的蛋白有修饰；导致条带偏大。
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5楼2023-05-04 19:53:55
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