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呀薯条

金虫 (小有名气)

[交流] 不同抗体孵育后,western 电泳条带总是出现在同一位置已有2人参与

求助各位大神,最近不知道什么原因,使用不同的一抗,在相同位置都会出现条带,而应该出现的位置又没有东西。封闭液、一抗、二抗都重新配置过,还是不行
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呀薯条

金虫 (小有名气)

我有相关western图片,可是不知道该怎么上传
2楼2023-03-30 15:41:57
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qzhyang2008

捐助贵宾 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
很明显。抗体没有问题。而是抗原蛋白发生片段降解,不同的抗体显色条带都应该是在你预期出现目的条带的下面,对吗?
3楼2023-04-03 08:59:11
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呀薯条

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by qzhyang2008 at 2023-04-03 08:59:11
很明显。抗体没有问题。而是抗原蛋白发生片段降解,不同的抗体显色条带都应该是在你预期出现目的条带的下面,对吗?

我试过几种不同的类型的蛋白,小鼠组织蛋白、细胞蛋白,自己提的还是别人提的,同一批跑下来,孵育同一种抗体,还是这个结果,43-55KD中间有个很明显的杂带,目的蛋白没有出现
4楼2023-05-04 08:52:20
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YU_DG

木虫 (正式写手)


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引用回帖:
4楼: Originally posted by 呀薯条 at 2023-05-04 08:52:20
我试过几种不同的类型的蛋白,小鼠组织蛋白、细胞蛋白,自己提的还是别人提的,同一批跑下来,孵育同一种抗体,还是这个结果,43-55KD中间有个很明显的杂带,目的蛋白没有出现...

只加二抗有此条带吗?如果不加抗体,只加二抗还有该条带的话,可能是样品中有与二抗结合的蛋白;如果目的蛋白比55kd小的话,是不是目的蛋白有修饰;导致条带偏大。
5楼2023-05-04 19:53:55
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