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汕头大学海洋科学接受调剂
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20022002db

[交流] 构建出来的质粒重新酶切切不出来了

大家好,我之前构建了一系列质粒,送测序也都是对的,但是后来再重新提质粒怎么切也切不出来了,谁能帮我解释一下啊,谢谢了

[ Last edited by amisking on 2009-9-27 at 20:44 ]
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gyesang

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amisking(金币+3,VIP+0): 9-27 20:44
看看你用的酶是否是甲基化敏感的,再看看你的酶切位点中是否有Dam 的甲基化序列GATC或Dcm 甲基化的序列GGA/TCC,可能你构建好的载体转到大肠杆菌里面去,再提出来的质粒,酶切位点被甲基化了,所以酶切不开
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2009-09-25 19:46:25
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)

看看酶切位点突变没。
2楼2009-09-25 15:20:21
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695

木虫 (职业作家)

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amisking(金币+3,VIP+0): 9-27 20:44
我也遇到过这样的问题,多挑几个菌试试吧,还有就是酶切时间的问题,如果酶量不多,体系不大的话,最好不要时间太长
3楼2009-09-25 15:25:58
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wsshforget

金虫 (小有名气)

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amisking(金币+2,VIP+0): 9-27 20:44
你是大提还是小提,是用试剂盒还是手提?要是手提的话注意溶液2的问题,还要注意酶是不是失活了。
5楼2009-09-27 09:29:37
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