应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 构建出来的质粒重新酶切切不出来了
51/1返回列表
查看: 934  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

20022002db

[交流] 构建出来的质粒重新酶切切不出来了

大家好，我之前构建了一系列质粒，送测序也都是对的，但是后来再重新提质粒怎么切也切不出来了，谁能帮我解释一下啊，谢谢了

[ Last edited by amisking on 2009-9-27 at 20:44 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-09-25 11:39:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0): 9-27 20:44
看看你用的酶是否是甲基化敏感的，再看看你的酶切位点中是否有Dam 的甲基化序列GATC或Dcm 甲基化的序列GGA/TCC，可能你构建好的载体转到大肠杆菌里面去，再提出来的质粒，酶切位点被甲基化了，所以酶切不开
赞一下(12人) 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2009-09-25 19:46:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

nicknelson

至尊木虫 (职业作家)
看看酶切位点突变没。
赞一下 回复此楼
2楼2009-09-25 15:20:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

695

木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0): 9-27 20:44
我也遇到过这样的问题，多挑几个菌试试吧，还有就是酶切时间的问题，如果酶量不多，体系不大的话，最好不要时间太长
赞一下(11人) 回复此楼
3楼2009-09-25 15:25:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wsshforget

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 9-27 20:44
你是大提还是小提，是用试剂盒还是手提？要是手提的话注意溶液2的问题，还要注意酶是不是失活了。
赞一下(11人) 回复此楼
5楼2009-09-27 09:29:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 4/200 2026-11-11 17:44 by TgvkbZZl9tqB
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 7/350 2026-11-11 17:31 by TgvkbZZl9tqB
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 10/500 2026-11-11 17:25 by TgvkbZZl9tqB
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 7/350 2026-11-11 17:20 by TgvkbZZl9tqB
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 17:09 by TgvkbZZl9tqB
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 7/350 2026-11-11 16:58 by TgvkbZZl9tqB
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 7/350 2026-11-11 16:52 by TgvkbZZl9tqB
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 8/400 2026-11-11 16:49 by TgvkbZZl9tqB
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 4/200 2026-11-11 15:24 by TgvkbZZl9tqB
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 4/200 2026-11-11 14:24 by cdqGD6ftHmbl
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 7/350 2026-11-11 13:51 by cdqGD6ftHmbl
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 7/350 2026-11-11 13:31 by cdqGD6ftHmbl
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 6/300 2026-11-11 10:32 by 1Nb0IVlmV6v0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-11 09:20 by Equinoxhua
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 4/200 2026-11-11 08:34 by 1Nb0IVlmV6v0
[文学芳草园] 厉娜 +3 张丹枫1991 2026-11-09 5/250 2026-11-09 16:53 by 张丹枫1991
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 15/750 2026-11-09 13:19 by Equinoxhua
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 11:52 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 16/800 2026-11-09 11:47 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 10/500 2026-11-09 08:00 by IhnEQauGmT3K
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭