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oase

金虫 (小有名气)

[交流] 茚三酮显色测氨基酸含量 已有20人参与

最近在做茚三酮测氨基酸含量实验,在做标准曲线时,连做了三次,发现每次结果都不一样,而且吸光度也不是线性(显色后颜色和浓度也不成比例)。我用亮氨酸做的,浓度梯度为0.06---0.3umol/ml. 茚三酮试剂(1g茚三酮溶于50ml95%乙醇),缓冲液用的pH5.4的2M醋酸缓冲液。反应时加标准液后,再加1ml缓冲液,1ml茚三酮,水浴15min,冷却静置5min后,加3ml60%乙醇,570nm比色。结果显色后有的没变色(仍为黄色),有的为蓝色,但是颜色和浓度不成比例。不知道哪出的问题?恳请各位做过相关实验的给点指导意见,谢谢了!

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-25 at 10:51 ]
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664631081

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by zthy0000 at 2010-04-26 22:59:38
不知道楼主的水浴温度是多少度,显色的话要煮沸15分钟的,还有就是冷却好后再定容到标准容量的比色管或容量瓶中,再测吸光值,一般线性没有问题的,我做过不少次,基本0.9990以上吧

你好,能把你的方法详细地说一下嘛?我做了好几次都没成线性。。。需要注意什么吗?你说的我都照做了。。。。
19楼2016-01-06 18:01:00
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者


oase(金币+1,VIP+0): 9-26 15:50
很好,你所说的就是这样的,这个方法本来就很不准

氨基酸定量我们都用专用的 HPLC 柱子。
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
3楼2009-09-26 05:46:10
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oase

金虫 (小有名气)

哦,不过我还是想试试这种方法,难倒真的就不准吗?
4楼2009-09-26 15:52:35
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insnfeng

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我们实验室也有同样的问题,无法解决!

标准曲线不是线性。
5楼2010-03-22 15:42:05
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