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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)

[交流] 怎样保证阅读框的正确?

想要把目的基因扩增之后先插入T载体,不知道还要不要考虑阅读框改变的问题?
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by njlf1258 at 2009-9-25 09:59:
如果需要做表达的话,应该考虑阅读框。但可以省略TA克隆这一步,直接用PCR产物测序后克隆入表达载体。然后利用表达载体再测序鉴定。

如您所说,我要做表达,有人也说可以省略TA克隆这一步。我不是很明白-------能否进一步解释一下呢?谢谢!

我是这么想的:我想保证目的基因的正确和完整,所以想TA克隆后去测序。之后如果有问题,至少我可以排除目的基因的不正确这一条。TA克隆的目的是什么呢?仅仅是为了测序方便吗?又想目的基因是在质粒上,好像不用TA克隆------反正好乱!思路不清晰!
12楼2009-09-26 09:27:27
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你是验证是否有基因不需要,如果验证功能,不仅考虑阅读框,还有考虑方向性
帮助虫友,提升自己
2楼2009-09-24 15:54:52
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)


amisking(金币+1,VIP+0): 10-17 12:25
是验证是否有基因,基因是否完整。正确的话再扩出来,构建表达载体做融合表达。是不是这样就不用管阅读框的问题了?谢谢啊!
3楼2009-09-24 16:00:52
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gastrodia

金虫 (正式写手)

如何确定其阅读框?看一看你序列前面还有无ATG,无ATG无所谓,在软件上做电子克隆,预翻译即可
4楼2009-09-24 20:44:26
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