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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)

[交流] 怎样保证阅读框的正确?

想要把目的基因扩增之后先插入T载体,不知道还要不要考虑阅读框改变的问题?
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你是验证是否有基因不需要,如果验证功能,不仅考虑阅读框,还有考虑方向性
帮助虫友,提升自己
2楼2009-09-24 15:54:52
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)


amisking(金币+1,VIP+0): 10-17 12:25
是验证是否有基因,基因是否完整。正确的话再扩出来,构建表达载体做融合表达。是不是这样就不用管阅读框的问题了?谢谢啊!
3楼2009-09-24 16:00:52
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gastrodia

金虫 (正式写手)

如何确定其阅读框?看一看你序列前面还有无ATG,无ATG无所谓,在软件上做电子克隆,预翻译即可
4楼2009-09-24 20:44:26
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695

木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by gastrodia at 2009-9-24 20:44:
如何确定其阅读框?看一看你序列前面还有无ATG,无ATG无所谓,在软件上做电子克隆,预翻译即可

请问用什么软件可以做电子克隆呢?多谢了
5楼2009-09-24 23:10:30
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boouy

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
很多软件都可以,最经典的是Vector NTI
6楼2009-09-25 07:54:19
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
插入T载体还要不考虑阅读框改变吗?
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
7楼2009-09-25 08:08:11
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gastrodia

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 10-11 16:54
如楼上所言,vectorNTI即可做电子克隆,至于插入T载体要不要考虑阅读框是否改变要看你的目的,若只是克隆载体,无所谓,若是表达载体,就要注意阅读框的变化,你是想要表达融合蛋白,修饰后的蛋白又或是原始蛋白,表达原始蛋白要求启动子后你的ATG前不能有ATG,你的tag之前不能有TAG和TAA,
8楼2009-09-25 09:44:35
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njlf1258


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果需要做表达的话,应该考虑阅读框。但可以省略TA克隆这一步,直接用PCR产物测序后克隆入表达载体。然后利用表达载体再测序鉴定。
9楼2009-09-25 09:59:39
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)

谢谢各位!受益很大!
10楼2009-09-25 10:24:17
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