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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 怎样保证阅读框的正确？
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)

[交流] 怎样保证阅读框的正确？

想要把目的基因扩增之后先插入T载体，不知道还要不要考虑阅读框改变的问题？
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1楼 2009-09-24 15:46:50
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你是验证是否有基因不需要，如果验证功能，不仅考虑阅读框，还有考虑方向性
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帮助虫友，提升自己
2楼2009-09-24 15:54:52
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)
★
amisking(金币+1,VIP+0): 10-17 12:25
是验证是否有基因，基因是否完整。正确的话再扩出来，构建表达载体做融合表达。是不是这样就不用管阅读框的问题了？谢谢啊！
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3楼2009-09-24 16:00:52
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gastrodia

金虫 (正式写手)
如何确定其阅读框？看一看你序列前面还有无ATG，无ATG无所谓，在软件上做电子克隆，预翻译即可
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4楼2009-09-24 20:44:26
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695

木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by gastrodia at 2009-9-24 20:44:
如何确定其阅读框？看一看你序列前面还有无ATG，无ATG无所谓，在软件上做电子克隆，预翻译即可

请问用什么软件可以做电子克隆呢？多谢了
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5楼2009-09-24 23:10:30
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boouy

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
很多软件都可以，最经典的是Vector NTI
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6楼2009-09-25 07:54:19
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
插入T载体还要不考虑阅读框改变吗？
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漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
7楼2009-09-25 08:08:11
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0): 10-11 16:54
如楼上所言，vectorNTI即可做电子克隆，至于插入T载体要不要考虑阅读框是否改变要看你的目的，若只是克隆载体，无所谓，若是表达载体，就要注意阅读框的变化，你是想要表达融合蛋白，修饰后的蛋白又或是原始蛋白，表达原始蛋白要求启动子后你的ATG前不能有ATG，你的tag之前不能有TAG和TAA，
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8楼2009-09-25 09:44:35
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njlf1258

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果需要做表达的话，应该考虑阅读框。但可以省略TA克隆这一步，直接用PCR产物测序后克隆入表达载体。然后利用表达载体再测序鉴定。
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9楼2009-09-25 09:59:39
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)
谢谢各位！受益很大！
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10楼2009-09-25 10:24:17
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