Originally posted by njlf1258 at 2009-9-25 09:59:
如果需要做表达的话，应该考虑阅读框。但可以省略TA克隆这一步，直接用PCR产物测序后克隆入表达载体。然后利用表达载体再测序鉴定。

Originally posted by 彩云朵朵 at 2009-9-26 09:27:




如您所说，我要做表达，有人也说可以省略TA克隆这一步。我不是很明白-------能否进一步解释一下呢？谢谢！

我是这么想的：我想保证目的基因的正确和完整，所以想TA克隆后去测序。之后如果有问题，至少 ...

Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-9-27 09:42:



做TA克隆的主要目的是：
1、TA很容易连接并长出单克隆进行挑选，直接连你的目的载体的话肯定没有那么容易；
2、TA克隆这是一步将你的正确的目的基因放大的过程；
3、测序方便，直接用通用引物就可以了了 ...

Originally posted by bioxixi at 2009-10-11 16:05:
插入T载体不需要考虑读码框，但是这不是你的最终目的吧，你如果是要测序后做表达的话，那肯定读码框是必须要考虑的，否则没有意义了呀，如果目的基因要用于后续的表达就要考虑，总不至于测序用一个，表达再用另外 ...