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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 怎样保证阅读框的正确？
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
你既然是做TA克隆的话肯定主要是为了测序和将基因的拷贝数增加，没有必要考虑阅读框是否改变，可能等表达的时候在看看。
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11楼2009-09-25 23:22:01
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by njlf1258 at 2009-9-25 09:59:
如果需要做表达的话，应该考虑阅读框。但可以省略TA克隆这一步，直接用PCR产物测序后克隆入表达载体。然后利用表达载体再测序鉴定。

如您所说，我要做表达，有人也说可以省略TA克隆这一步。我不是很明白-------能否进一步解释一下呢？谢谢！

我是这么想的：我想保证目的基因的正确和完整，所以想TA克隆后去测序。之后如果有问题，至少我可以排除目的基因的不正确这一条。TA克隆的目的是什么呢？仅仅是为了测序方便吗？又想目的基因是在质粒上，好像不用TA克隆------反正好乱！思路不清晰！
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12楼2009-09-26 09:27:27
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0):总结的很好啊！ 10-11 16:54
amisking(金币+4,VIP+0): 10-17 12:36
amisking(金币+0,VIP+0):追加鼓励！ 10-17 12:37
引用回帖:
Originally posted by 彩云朵朵 at 2009-9-26 09:27:




如您所说，我要做表达，有人也说可以省略TA克隆这一步。我不是很明白-------能否进一步解释一下呢？谢谢！

我是这么想的：我想保证目的基因的正确和完整，所以想TA克隆后去测序。之后如果有问题，至少 ...

做TA克隆的主要目的是：
1、TA很容易连接并长出单克隆进行挑选，直接连你的目的载体的话肯定没有那么容易；
2、TA克隆这是一步将你的正确的目的基因放大的过程；
3、测序方便，直接用通用引物就可以了了，或许你是不知道你的目的载体的序列的。
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13楼2009-09-27 09:42:16
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xuezhen

银虫 (小有名气)
我也学习一下。
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14楼2009-09-27 19:50:44
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-9-27 09:42:



做TA克隆的主要目的是：
1、TA很容易连接并长出单克隆进行挑选，直接连你的目的载体的话肯定没有那么容易；
2、TA克隆这是一步将你的正确的目的基因放大的过程；
3、测序方便，直接用通用引物就可以了了 ...

非常感谢！
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15楼2009-10-11 09:54:40
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bioxixi

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
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amisking(金币+3,VIP+0): 10-17 12:36
插入T载体不需要考虑读码框，但是这不是你的最终目的吧，你如果是要测序后做表达的话，那肯定读码框是必须要考虑的，否则没有意义了呀，如果目的基因要用于后续的表达就要考虑，总不至于测序用一个，表达再用另外的引物吧

先搞清楚再实验，可以避免许多弯路，磨刀不误砍柴工啊
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16楼2009-10-11 16:05:30
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by bioxixi at 2009-10-11 16:05:
插入T载体不需要考虑读码框，但是这不是你的最终目的吧，你如果是要测序后做表达的话，那肯定读码框是必须要考虑的，否则没有意义了呀，如果目的基因要用于后续的表达就要考虑，总不至于测序用一个，表达再用另外 ...

谢谢！
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17楼2009-10-17 12:17:01
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xj22667

银虫 (小有名气)
★
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要做表达的话是要搞清楚，否者发生移码是很麻烦的
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18楼2009-10-17 16:27:58
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