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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » ISSR-PCR？
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kwkw

木虫 (著名写手)

[交流] ISSR-PCR？

有人做ISSR-PCR出过吗？我看ISSR好像都扩出10-20条带，可我最好的时候只扩出8、9条带，而现在只出一条带还只有200bp左右，谁出现过这种情况，如何解决的？我用同一引物扩不同的样品(同种)，用不同引物(ISSR)扩同一样品，四个产物差不了10bp，但还是不一样大的，问一下高手，这是什么原因？我应该改一下哪个因素？那个梯度PCR仪有一个封片断了一点，密封性差一点会影响实验结果吗？
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1楼 2009-09-23 21:45:23
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695

木虫 (职业作家)
★
kwkw(金币+1):谢谢参与
正常了吧，材料不一样，结果也会不一样，统计标准不一样，结果也不一样的，只要结果差不多就行了，我当时AFLP也遇到过这样的问题
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2楼2009-09-23 22:12:44
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kwkw

木虫 (著名写手)
不是，我现在还在做预实验，一条ISSR引物就扩出一条带，这应该是不正常的。我想知道这是什么原因？别人做都是特异性差，我这特异性也太强了吧？
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3楼2009-09-24 07:48:55
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zxhong

金虫 (正式写手)
★
kwkw(金币+1):谢谢参与
lz能否帮忙列一下ISSR所用药品,并麻烦告知作ISSR的目的是?
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4楼2009-09-24 08:39:02
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kwkw

木虫 (著名写手)
PCR反应体系：10×buffer  TAQ酶 dNTP 单引物  总DNA .目的是用微卫星重复序列作为引物来扩增两个微卫星之间的序列，研究生物的遗传多样性
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5楼2009-09-24 17:12:38
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louyiceng

荣誉版主 (知名作家)

优秀版主
★
kwkw(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by kwkw at 2009-09-24 17:12:38:
PCR反应体系：10×buffer  TAQ酶 dNTP 单引物  总DNA .目的是用微卫星重复序列作为引物来扩增两个微卫星之间的序列，研究生物的遗传多样性

谢谢
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6楼2010-03-15 07:55:06
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eesing

金虫 (正式写手)
★
kwkw(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
1楼: Originally posted by kwkw at 2009-09-23 21:45:23:
有人做ISSR-PCR出过吗？我看ISSR好像都扩出10-20条带，可我最好的时候只扩出8、9条带，而现在只出一条带还只有200bp左右，谁出现过这种情况，如何解决的？我用同一引物扩不同的样品(同种)，用不同引物(ISSR)扩同一 ...

现在楼主做出来了吗？我也在做发现同一次三个一样的pcr体系，扩增出来结果有显著差异，不知lz有一样的情况吗？如何解决的呢？还有就是背景有点亮，像是抹带，望指点，谢谢
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7楼2011-08-17 07:45:46
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