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[求助]
蛋白偶联荧光素后浓度测定
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最近纯化蛋白然后在测定浓度方面遇到一些问题，所以来求助大家！ 1.单体和二倍体混合物的浓度如何确定（蛋白形成了dimer），然后还原成单体后会不会出现浓度变高的情况？———我的目的蛋白他的单体和dimer的消光系数是一样的； 2.蛋白/抗体偶联荧光基团之后应该如何测定浓度，像是偶联AF 488/568这些荧光基团-我用microdrop测的图在下面——我总共只用了60ug蛋白，不考虑脱盐浓缩损耗掉的，最后测反而含量增加了——我使用的蛋白是单体和dimer混合物，但是在偶联之前加入了工作浓度为10mM的TCEP打开双建； 3.偶联荧光基团后的抗体/蛋白应该怎么保存——有的说不能-20℃，荧光会淬灭——但是很多在售的荧光蛋白都是-20℃保存的； 4.关于3 K filter（Millipore）的问题：使用3K浓缩置换20kd左右大小的蛋白，然后浓缩后取flow through和浓缩液做ELisa，发现流穿也有活性，也还有蛋白？可是20kD左右的是如何穿过3k的膜的？不管是新投入使用的filter还是用过一次的都一样； 🤦♂️@hc-material@gyesang |
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