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梧桐眼

金虫 (著名写手)

[交流] 求助:关于pcr产物纯化

PCR后电泳能够看到明亮的条带 大约1000bp左右 ,然后使用试剂盒纯化后就看不到条带了 !  可能是啥原因。纯化试剂盒是 UNIQ-10柱式DNA胶回收试剂盒 。


                            谢谢  祝好!
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wangxiaoli8216

木虫 (小有名气)


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是切胶后纯化的还是直接纯化的呢?如果是切胶纯化的话,有可能切胶没切好;如果PCR产物是单一条带,可以直接用PCR产物纯化试剂盒。
2楼2009-09-22 10:30:30
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飞侠8683

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
也有可能是与柱子结合太紧,洗不下来
3楼2009-09-22 10:43:43
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gastrodia

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0): 9-22 20:23
试剂盒纯化后看不到条带?你电泳上样量是多少,洗脱体积大,上样量太小就看不出来,曝光的时间加大一些,如果加大上样量也看不到条带,你回收的时候有问题
4楼2009-09-22 10:48:41
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changes

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
很可能是回收时胶没融好,注意温度和时间。
5楼2009-09-22 11:10:03
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梧桐眼

金虫 (著名写手)

谢谢 大家
6楼2009-09-22 12:40:03
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寒山拾得

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
溶解体积缩小一下。应该问题不大
7楼2009-09-22 12:43:23
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梧桐眼

金虫 (著名写手)

弄明白了  是我少加了 试剂   不要笑我 !好白痴的错误哦 !
8楼2009-09-22 12:59:48
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bioxixi

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
首先问一下这个柱子以前用过吗?要是第一次用,先检查试剂是不是加全了,比如有的需要加乙醇之类的没有忘记吧
胶一定要充分融化,再就是最好洗的时候可以把洗脱缓冲液预热一下,增加洗的时间,再就是把洗脱的溶液加到柱子上再洗一次,这样洗脱效率会有很大的提高。
只要柱子的膜和试剂没问题,应该不会出错的,再试一次吧
9楼2009-09-22 13:21:48
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zuodongyun

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
严格按照试剂盒说明做,不可能没有的
10楼2009-09-22 18:03:02
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