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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » IPTG诱导后直接-20℃冰冻 第二天融化后超声破碎 这样对蛋白活性有没有影响？
汕头大学海洋科学接受调剂
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luckydog52

木虫 (著名写手)

[交流] IPTG诱导后直接-20℃冰冻 第二天融化后超声破碎 这样对蛋白活性有没有影响？

IPTG诱导5h之后直接放在了-20摄氏度冰箱里
第二天融化后破碎，对蛋白表达 和活性有影响吗？

超声破碎条件是 3s/3s  80循环  5次  40分钟 大肠杆菌这样破碎行不行？

[ Last edited by luckydog52 on 2009-9-21 at 17:49 ]
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自信源于一次次成功的积累
1楼 2009-09-21 17:00:48
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goodwish

木虫 (正式写手)

木虫书呆子
★
luckydog52(金币+1,VIP+0): 9-22 09:26
应该没有影响。最好是离心后只把菌体沉淀冻存。
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生命的海洋里，我是蓝色的一滴
4楼2009-09-22 00:04:15
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黑罕

金虫 (小有名气)
不会，反而对破碎更有利
超声破碎条件  间隔时间可以长些
另外，多少次多少时间视破碎情况而定
总之，要菌液澄清不粘连即可
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3楼2009-09-21 18:57:24
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mascotte

金虫 (正式写手)
★ ★
luckydog52(金币+2,VIP+0): 9-22 09:22
菌体破碎的方法比较多，反复冻融破碎和超声破碎都比较常用，冻融一般推荐急冻（液氮），超声的功率不要太大，我一般用50-100w，间隔时间长是为了保证温度不过高的，建议冰水浴超声，但是各种破碎的操作都需要视情况加入蛋白酶抑制剂 PMSF等
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5楼2009-09-22 03:45:34
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
这个嘛，要离心去除发酵液，提前分装好后放入-20℃冰箱，
一般没有影响的，
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
6楼2009-09-22 10:40:50
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