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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何测定表达的酶量及活力
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彤彤0122

金虫 (小有名气)

[交流] 如何测定表达的酶量及活力

求教各位大大
我在一个重组菌中表达一种酶，我想测它表达的合不合我要求
应该用什么方法？
比如酶量测定，酶活测定，比活测定等
详细一点说明，谢谢。。
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1楼 2009-09-19 14:22:30
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gastrodia

金虫 (正式写手)
你是什么酶啊？你的要求是啥？你表述的都不明不白，别人怎么解答你的疑问啊？
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2楼2009-09-19 16:08:41
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qingjunlei

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350784478(金币+2,VIP+0):谢谢参与 9-20 11:52
那就要看你表达需要纯化与浓缩不啊
一般需要过柱纯化后浓缩，用SDS-PAGE定量
用国家标准的酪素测定活力
其他活性测定应该参照酶的具体性质而定
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3楼2009-09-19 16:13:40
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
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350784478(金币+2,VIP+0):感谢参与 9-20 11:52
你如果想看看有没有酶活，可以先破碎细胞提取粗酶液，测其酶活（方法要看你要测什么酶），如果与对照相比酶活提高明显那就表达了啊！如果差距不明显的话，可以再纯化了再测酶活。
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4楼2009-09-19 16:22:53
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彤彤0122

金虫 (小有名气)
谢谢楼上几位，还有问题就是比活怎么测？还有KM值怎么算？谢谢。。
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5楼2009-09-20 11:41:36
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
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计算比酶活是你需要多测一个蛋白质的总浓度，通过你测得的酶活便可以计算比酶活了。Km值我没算过，我觉得测酶活一般都是通过反应速度来计算酶活的吧，有了这个反应速度当然就可以计算出Km了，不知道说的对不对。
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6楼2009-09-20 12:19:35
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