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舒克舒孟德

新虫 (初入文坛)

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[求助] 求助关于pcr假阳性和重组质粒一些问题

重构质粒后跑了菌液pcr，但是没用通用引物跑，而是自己的引物，结果跑出来条带和目标相符，送去测序发现是空载
那么有两种可能，1. 引物被模板污染 2. 假阳性
但是假阳性为什么会跑出和目的基因大小一样的片段呢，是两端都有黏附么。模板污染也不太对，之前有没跑出来的。
空载的原因：1.没连接上 2.挑菌没挑到
关于快切酶时间和T4链接时间，我切了两个小时，连了6个小时，有没有可能是没连上呢
求助分析一下原因

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1楼 2023-02-20 16:29:57

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