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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » DH5α转化子的菌液PCR条带暗极了
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&夏至

新虫 (初入文坛)

[交流] DH5α转化子的菌液PCR条带暗极了 已有3人参与

通过PCR将目的基因和载体线性化，然后做纯化和切掉质粒，用的无缝克隆连接，转化大肠，可是长了满满的一板子，挑单菌落去做菌液PCR批目的基因，但是仅有微弱的条带和甚至没有条带，反而是引物二聚体比较亮，有没有师兄师姐们遇到过类似的情况呀这是什么原因啊？按说就算有一点点的模板，也不应该条带暗的几乎没有呀。而且前面目的基因线性化的时候目的基因条带非常亮的，没有那么亮的引物二聚体

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1楼 2023-02-15 00:09:50
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一点也不简单

新虫 (知名作家)
没有连接成功

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2楼2023-02-15 06:59:00
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&夏至

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 一点也不简单 at 2023-02-15 06:59:00
没有连接成功

那请问为什么做菌液PCR会有条带呀，只是比较弱我实在想不通了

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3楼2023-02-15 21:41:01
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AD_com

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果用通用引物检测的话，你所谓的引物二聚体应该在150左右大小，这应该是扩增的载体片段，而不是引物二聚体，换句话说，你没连上
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4楼2023-02-16 13:12:30
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X似水流年X

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以提质粒验证一下

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5楼2023-02-16 14:07:47
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&夏至

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by X似水流年X at 2023-02-16 14:07:47
可以提质粒验证一下

好的，谢谢

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6楼2023-02-17 09:00:32
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&夏至

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by AD_com at 2023-02-16 13:12:30
如果用通用引物检测的话，你所谓的引物二聚体应该在150左右大小，这应该是扩增的载体片段，而不是引物二聚体，换句话说，你没连上

好的，我再仔细检查一下，感谢

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7楼2023-02-17 09:01:30
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