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银虫 (初入文坛)

[交流] 酶活与孵育时间

最近在做酶的体外孵育试验,在蛋白仅仅与缓冲液共孵育的情况下,酶活会随着时间而上升,但是当加入了NADPH而,这种现在就没有了。
请问酶的孵育时间与酶活,或是在NADPH参与的情况下,这种现象该怎么解释?
实验分2租
1 蛋白+缓冲液(Tris-HCL/EDTA ph7.4)37度 孵育40分钟,每10分钟取一定量测定酶活
2 蛋白+缓冲液(Tris-HCL/EDTA ph7.4)+NADPH 37度 孵育40分钟,每10分钟取一定量测定酶活
结果如图:
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银虫 (初入文坛)

没人回复啊,快沉了~~l
来点人给些意见啊,哪怕是猜测也行
2楼2009-09-18 09:55:20
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银虫 (初入文坛)

没人回复啊,快沉了~~l
来点人给些意见啊,哪怕是猜测也行
3楼2009-09-18 09:55:53
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zhuangyu8188

铁虫 (小有名气)

请问你这个是什么酶?
4楼2009-09-18 11:00:36
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經天

铁杆木虫 (著名写手)


350784478(金币+1,VIP+0):感谢参与 9-18 13:05
NADPH很有可能是你这个酶的抑制剂,不过你现在的曲线太简单,有更详细的图吗?
一种与世无争的上进,内在的坚毅和质朴无华的大度!【穷吾一生而追求之!】
5楼2009-09-18 11:06:10
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paulajjh

木虫 (著名写手)

★ ★
350784478(金币+2,VIP+0):谢谢参与 9-18 13:06
你给的条件很简单,一,不知道你的是什么酶;二,你的间隔10min也不见得长;三,你测定酶活的方法我们也不知道;综上所述,无法根据你现给的东西分析,给你建议。
建议你将更详细的资料上传以便大家给你建议。
6楼2009-09-18 12:32:28
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银虫 (初入文坛)

CYP450酶,测定CYP1A活性(EROD)
EROD方法参照 Krijgsheld, K.R., Gram, T.E., 1984. Selective induction of renal
microsomal cytochrome P450-linked monooxygenases by 1,1-dichloroethylene in mice. Biochem. Pharmacol. 33,1951-1956.
孵育方法参照 Renee D.Induction and Post-Transcriptional Suppression of Hepatic Cytochrome P450 1Al by 3,3’,4,4’-Tetrachlorobiphenyl Biochemical Pharmacology, Vol. 53, pp. 1029-1040, 1997.
方法都是以前用过的,没什么问题的
7楼2009-09-18 23:50:26
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银虫 (初入文坛)

昨天又增加了时间,到80min了,再补个图
8楼2009-09-18 23:57:55
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