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nick.nye-0313

铜虫 (小有名气)

[交流] 求助,有玻璃珠提DNA经验的请帮帮忙!谢谢!

一般动物组织提DNA方法不用常规方法,有没有更简单的方法,不用蛋白酶消化的!
还有,有没有大虾用玻璃珠提DNA比较有经验的!可否讲讲实验过程应该注意什么问题!
谢谢!
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只为成功找方法
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l_inhumain

金虫 (小有名气)


amisking(金币+1): 2010-02-05 21:00
用玻璃珠提过微生物的,没提过动物的。
2楼2009-09-17 16:57:28
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小猫三两只

金虫 (正式写手)


amisking(金币+1): 2010-02-05 21:00
是的,我用玻璃珠提过酵母的质粒DNA
3楼2009-09-17 21:42:49
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nick.nye-0313

铜虫 (小有名气)

那能给讲讲微生物玻璃珠提DNA的过程和注意事项吗?谢谢!
只为成功找方法
4楼2009-09-18 15:44:43
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charlies929

至尊木虫 (正式写手)

★ ★ ★
nick.nye-0313(金币+1,VIP+0): 9-23 09:11
amisking(金币+2): 2010-02-05 21:00
nick.nye-0313(金币+1): 2010-03-19 12:04
1. 我们实验室有位用玻璃珠超酵母过于猛烈,最后连探头都被超掉一小块。
2. 注意加入玻璃珠后产热比较多,一定要降低每个循环的时间,可以适当增加循环数
3. 发现超酵母中玻璃珠加入为终体积的50%效果比较好
4. 玻璃珠一般保存在酸性溶液中,故在加入前一定要清洗干净
5楼2009-09-18 21:20:35
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l_inhumain

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
nick.nye-0313(金币+1,VIP+0): 9-23 09:11
amisking(金币+3): 2010-02-05 21:01
nick.nye-0313(金币+1):谢谢! 2010-03-19 12:05
1. 收集菌液,用TE Buffer洗一两遍
2. 用200 uL TE Buffer 重悬菌体
3. 加50mg 玻璃珠,加入100ul 酚氯仿
4. 剧烈震荡 1-2min
5. 离心12000rpm,5min
6.转以上清(160ul)至新管
7.补加40ulTE Buffer,加200ul 酚氯仿
8. 抽提离心12000rpm,5min
9.转以上清后,用RNase消化一下
后面再抽提一下就可以了。
做PCR一点问题都没有
我们买的玻璃珠就直接用的,震荡是用的那种重悬细胞的仪器,振起来非常剧烈。
6楼2009-09-18 22:42:32
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qqsvery

木虫 (著名写手)

★ ★
amisking(金币+2): 2010-02-05 21:01
提取动物组织的DNA就是用传统方法啊!而且效果非常好!浓度能达到2000ng/ul呢!就是步骤有些繁琐,要是样品不多的话,也不会很麻烦,我把大致的步骤给你说一下吧:
1.剪碎组织样品
2.加裂解液、RNA酶,37度恒温箱裂解2个小时
3.加蛋白酶K,过夜消化(隔半个小时去摇一次)
4.用氯酚访法提取DNA,就是反复的离心,取上清
谎言和真实在河边洗澡,谎言先洗好,穿走了真实的衣服,真实却不肯穿谎言的衣服。后来人们眼里只有穿着真实衣服的谎言,却很难接受赤裸裸的真实。
7楼2010-02-05 15:49:42
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