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求助，为什么PET28a双酶切过夜大孔胶检测没有条带
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用质粒pet28a做克隆载体，酶切位点是HindⅢ和XbaⅠ，和PCR片段一起双酶切过夜大孔胶电泳割胶。PCR片段跑带很清晰，pet28a什么都没有！用的是50微的体系，质粒加了15微，质粒鉴定过条带是正确的。 后来专门只做pet28a的双酶切，以为是质粒浓度不够，加大质粒的量，20微，30微都做了，过夜酶切也是没有  但是有次切了5小时左右有比较暗的带。请教高手，是什么原因？过夜酶切时间太长了？酶只切这两个点应该不会是时间的问题吧 |
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