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huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)

[交流] 最近做酶切为什么质粒老是别切碎啊

最近在做实验室,用xbal 1和kpn1做双酶切为什么老是切碎了,我用的体系是 50ul,其中30ul质粒,这两种酶各1ul,期待各位的帮助
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
huangdi07(金币+1):谢谢参与
huangdi07(金币+2,VIP+0): 9-21 18:50
我也来参与一下:首先不存在酶切时间长的问题
1,多个目的酶切位点,重新检验一下酶切位点
2,酶污染,换酶试试
3,DNA本身就污染了降解酶,酚氯仿抽提一下
帮助虫友,提升自己
15楼2009-09-21 16:45:09
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


huangdi07(金币+1,VIP+0): 9-17 15:42
我决的最有可能的就是你的质粒上有还有其他的这两种酶的酶切位点,你可以再看一下;还有可能就是你酶切的时间太长了。你酶切的时间是多少?
3楼2009-09-17 14:02:12
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huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)

质粒就切了两个小时啊,pcr产物过夜切然后第二天又补加酶切了两个小时,结果pcr片段没碎,质粒碎了
4楼2009-09-17 15:42:19
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

那你看看你的质粒上是不是还有这两种酶的酶切位点。
5楼2009-09-17 16:10:03
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