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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 最近做酶切为什么质粒老是别切碎啊
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huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)

[交流] 最近做酶切为什么质粒老是别切碎啊

最近在做实验室，用xbal 1和kpn1做双酶切为什么老是切碎了，我用的体系是 50ul，其中30ul质粒，这两种酶各1ul，期待各位的帮助
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1楼2009-09-17 13:44:05
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
那你看看你的质粒上是不是还有这两种酶的酶切位点。
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5楼2009-09-17 16:10:03
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
huangdi07(金币+1,VIP+0): 9-17 15:42
我决的最有可能的就是你的质粒上有还有其他的这两种酶的酶切位点，你可以再看一下；还有可能就是你酶切的时间太长了。你酶切的时间是多少？
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3楼2009-09-17 14:02:12
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huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)
质粒就切了两个小时啊，pcr产物过夜切然后第二天又补加酶切了两个小时，结果pcr片段没碎，质粒碎了
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4楼2009-09-17 15:42:19
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寒山拾得

木虫 (小有名气)
★ ★
huangdi07(金币+2,VIP+0): 9-17 22:52
你我可以把酶量减半试试。我用takala的也遇到过这样的问题，我一般把酶减半，然后1U酶切两ug质粒37度一小时。就可以了。
最好你把图贴上看看。同时做单酶切也是必须的。
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6楼2009-09-17 16:30:40
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