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xiyingliai

新虫 (著名写手)


[交流] 化学蛋白组学样品前处理中的疑问

求教蛋白组学大佬:蛋白样品biotin化之后连接streptavidin磁珠,然后进行on bead digestion前加入6m urea和10mm  dtt并65℃加热20min使蛋白变性,这一操作会不会破坏biotin和streptavidin之间的连接?
如果先将biotin化的蛋白消化再连streptavidin磁珠,连磁珠前是否需要加热灭活前一步的typsin防止其破坏streptavidin(因为它本质是个蛋白)?

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xiyingliai

新虫 (著名写手)


引用回帖:
28楼: Originally posted by 冰鉴照心 at 2023-02-10 14:46:45
直接用NHS磁珠通过化学键连接蛋白样品,比链霉亲和素磁珠要方便、牢靠。

NHS对所有蛋白伯氨基都连接,而我要做特定修饰组学,只能用特异性探针通过点击化学biotin化然后富集

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32楼2023-02-11 17:10:45
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chenhuanlong

禁虫 (文学泰斗)


xiyingliai(金币+2): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽

3楼2022-12-30 16:07:01
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zszly2楼
2022-12-29 21:28   回复  
xiyingliai(金币+2): 谢谢参与
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