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dengzelin520

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[交流] 多糖提取纯化检测交流请教

最近在提取分离植物里面的多糖，刚接触，很多不明白的地方，请做过的指教指教啊。
1. 提取的粗多糖先用3kDa的透析膜去小分子，但是换了几次水，透析了三天，得到的粗多糖颜色还是非常的深，请问这个颜色是什么物质带来的呢？我觉得多糖应该不会带颜色吧？
2. 粗多糖采用苯酚硫酸法测糖含量，再用硫酸-间羟基联苯法测酸性糖含量；这里苯酚-硫酸法测的糖含量是包括中性糖和酸性糖一起的总含量吗？
3. 在用DEAE分离中性糖和酸性糖的时候，用的55mm*350的柱子，上样样品20mg/mL，浓度再高就溶不了了，总的上样量怎么算呢，比如能上几百毫克？怎么上样比较合适？分离得到了5个组分，但是SEC-RI测了后都不是对称峰。DEAE分完后有大量的颜色洗脱不了，是小分子吗？
4. 再用Sephacry S200继续分离，柱子26mm*60mm，这个Sephacry是中性糖和酸性糖都可以分离吗？洗脱后收集80管，苯酚硫酸测后绘制洗脱曲线，怎么根据这个洗脱曲线合并馏分呢？因为合并的管子越少，组分应该越纯，但是丢的糖就多了。
5. 用DEAE和Sephacry分离后的回收率都很低，只有30%左右，其他的糖去哪里了呢？用高浓度的氯化钠后面洗脱出来的滤液也测不到糖了。得到的酸性糖还是带颜色的，为什么会有颜色呢？

谢谢，有好多不懂的，实验室之前也没有人做过，搞的头都大了