| 查看: 1782 | 回复: 22 | |||
| 【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 合肥肽库生物 的 156 个金币 ，回帖就立即获得 2 个金币，每人有 1 次机会 | |||
[交流]
多肽纯化中的常见问题
|
|||
|
转载整理自公号：多肽定制，如有侵权，请联系处理 1、检测肽纯度的一般方法是什么？ 它通常由高效液相色谱法（HPLC）测定。 2、肽含量和肽纯度有什么区别？ 肽不仅包含正确的肽，还包含杂质，例如生产中的水和有机盐。肽纯度是指相对于所有杂质（水分除外）正确肽的数量。然而，肽含量是目标肽相对于样品中其他所有物质的百分比，通常由 N 元素分析和氨基酸分析确定。因此，即使肽纯度达到99%，考虑到水和有机盐，含量仍可能为70%-80%。 3、肽分离纯化最常用的技术是什么？ 最常见的技术是反相高效液相色谱 (RP-HPLC)。 4、RP-HPLC 中通常使用哪种流动相进行肽分离和纯化？ 最常见的流动相是水和乙腈，三氟乙酸充当离子对试剂。根据不同的肽段，采用合适的梯度洗脱进行分离。 5、为什么在流动相中添加 TFA 作为离子对试剂？是否有任何其他流动相或离子对试剂可用于肽分离和纯化？ TFA可用于调节流动相的pH值，作为离子对试剂与多肽相互作用，增强分离效果，显着改善峰形。 其他用于多肽分离纯化的流动相或离子对试剂包括乙酸体系、磷酸体系、盐酸体系、七氟丁酸等，可通过调节pH达到很好的分离效果。 6、如何溶解多肽？ 大多数肽可以溶解在超纯水中。对于一些不溶性肽，需要先分析氨基酸序列。酸性肽可先溶于少量碱性溶液（如0.1%氨水），然后稀释至所需浓度。作为碱性肽，可溶于少量酸性溶液（如乙酸、三氟乙酸），然后稀释至所需浓度。对于疏水肽，可溶于强极性有机溶剂，如DMF、甲醇、丙醇、异丙醇、DMSO等。 7、RP-HPLC中常用的色谱填料有哪些？ 最常见的填料是 C18、C8 和 C4 反相色谱柱。 8、纯化中如何选择色谱填料？ 不同序列的肽在理化特性和疏水性方面表现出很大差异。在大多数情况下，C18 色谱柱对分子量小于 4000 或亲水性的肽段的分离效果最好。C4 柱适用于分子量超过 5000 或疏水末端。C8列介于C18和C4之间，其效果更类似于C18。对于一些特殊的选择性肽段，也可以选择苯基柱和聚合物柱。 9、纯化中选择聚合物填料的原则是什么？ 当需要更高的 pH 或温度时，具有宽 pH 范围的聚合物 HPLC 柱可能适用于纯化。它们在极端pH条件下不会降解，因此可以使用强酸和强碱作为流动相进行分离和纯化。 10、什么会影响多肽纯化的结果？ 影响因素很多，主要包括流动相、色谱柱类型、柱温、波长、色谱仪性能等。这些差异可能会导致最终结果出现错误。 11、频繁的基线漂移可能是什么原因？如何解决？ 反相分离中基线漂移的主要原因是固定 TFA 浓度的梯度洗脱会导致 210-220 nm 处的吸收基线发生偏移。建议使检测波长尽可能接近215 nm，以减少或消除TFA吸收光谱变化对基线漂移的影响。此外，与溶剂 B 相比，溶剂 A 中添加的 TFA 减少 15% 可以补偿基线漂移。例如，如果溶剂 A 中的 TFA 浓度为 0.1%，则建议溶剂 B 中添加 0.085% 12、反相色谱纯化后，如何从最终产品中去除流动相中的TFA、乙腈等杂质？ 只要不超过耐受范围，冻干可能是去除大部分 TFA 和乙腈的最简单和最有效的方法。但该方法不能满足一些对TFA含量要求较高的多肽类药物的要求。应与它们进行特殊的盐转化和脱盐。 13、肽的一般盐形式有哪些？如何转换盐形式或脱盐？ 大多数肽在TFA系统下纯化，因此TFA盐是最常见的形式，其次是乙酸盐和盐酸盐形式，很少有肽药物是特殊盐形式。离子交换和 HPLC 是最常用的盐转化方法，而 G25（GE Healthcare 的葡聚糖凝胶）柱可用于脱盐。 14、TFA 是否仅用于调节缓冲液中的 pH 值？TFA 浓度越高，基线漂移越严重。这是否意味着如果缓冲液的 pH 值允许，TFA 的浓度越低越好？ TFA可以作为离子对，浓度通常在0.05-0.1%左右。浓度过高会使溶液过酸，影响色谱柱的使用时间。 同时，TFA 可以抑制硅胶表面的硅烷醇基团，改善碱性化合物的峰形。如果使用 0.1% TFA 有时分离效果不好，可以尝试 0.2% TFA，但使用后需要立即冲洗色谱柱。 在梯度洗脱时，由于基线漂移，它对制备的影响很小。 15、为什么肽样品需要在上样柱前进行预处理？有哪些制备方法？ 制备柱更容易被污染，因为与分析柱相比，它们处理的样品更多。因此，需要对样品进行预处理以延长色谱柱的使用时间。主要有五种方法：过滤、离心、柱前过滤和在线过滤。 |
回复此楼» 猜你喜欢
环境工程 085701，267求调剂
已经有5人回复
-
275求调剂
已经有17人回复
-
334分 一志愿武理 材料求调剂
已经有6人回复
-
一志愿北京化工大学材料与化工（085600）296求调剂
已经有15人回复
-
085600 286分 材料求调剂
已经有9人回复
-
材料与化工272求调剂
已经有10人回复
-
南京大学化学调剂
已经有9人回复
-
085601材料工程找调剂
已经有13人回复
-
考研调剂
已经有6人回复
-
085600 材料与化工 329分求调剂
已经有13人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
陕西理工大学资源与环境、材料化工部分调剂名额，理工兼收
+1/195
-
五邑大学药学与食品工程学院 | 刘宇茸课题组 调剂招生
+5/95
-
2026年武汉纺织大学国家杰青课题组招收调剂化学 生物 医学 食品 环境研究生
+1/95
-
【招聘】清北（济南）生物科技招聘AI制药研发计算人才
+1/92
-
上海高校招收化学，材料，环境，化工等专业基础的同学攻读硕士研究生
+1/82
-
导师招生
+1/47
-
烟台大学环境与材料工程学院新能源材料课题组招硕士研究生
+1/41
-
招收2名土木工程方向硕士研究生
+1/37
-
沈阳农业大学生物与医药招收调剂生！！！！！！！！！！
+1/35
-
中国计量科学研究院长度量子基准实验室2026年调剂招生
+1/34
-
北京石油化工学院智能防腐涂层课题组招收2026级调剂研究生
+1/16
-
【实战型】【生物医药】2026青岛大学招博士生 含少数民族骨干计划2名！
+1/14
-
青岛科技大学0860 调剂招生
+1/11
-
中国科学院上海硅酸盐研究所招聘科研助理（纳米材料与生物应用方向）
+1/7
-
香港中文大学（深圳）生物智能制造方向招生-高分子功能材料、智能/仿生材料、生物材料
+1/6
-
广东医科大学 李雪萌教授团队 招收申请考核制博士（临床检验诊断）
+1/5
-
【博士招生】上海交通大学陈倩栎课题组招收2026年申请-考核博士生1名（能源材料方向）
+1/4
-
寻找26博士生导师
+1/4
-
北京石油化工学院机械系康举、张慧杰老师团招2026年研究生复试调剂考生，欢迎联系
+1/4
-
招收从事大气复合污染成因领域研究生
+1/3
chenhuanlong
禁虫 (文学泰斗)
★
专注多肽(金币+2): 谢谢参与
专注多肽(金币+2): 谢谢参与
|
本帖内容被屏蔽 |
7楼2022-11-17 11:41:28
23楼2022-12-06 16:36:29
简单回复
nono20092楼
2022-11-17 11:10
回复
专注多肽(金币+2): 谢谢参与
`
2022-11-17 11:20
回复
2022-11-17 11:20
回复
2022-11-17 11:21
回复
2022-11-17 11:40
回复
专注多肽(金币+2): 谢谢参与
2022-11-17 11:47
回复
专注多肽(金币+2): 谢谢参与
jiaoxg9楼
2022-11-17 11:53
回复
专注多肽(金币+2): 谢谢参与
风之影达10楼
2022-11-17 12:31
回复
专注多肽(金币+2): 谢谢参与
miaojiabing11楼
2022-11-17 12:42
回复
专注多肽(金币+2): 谢谢参与
假大空12楼
2022-11-17 17:36
回复
专注多肽(金币+2): 谢谢参与
顶
tzynew13楼
2022-11-17 20:11
回复
专注多肽(金币+2): 谢谢参与
i 发自小木虫Android客户端
dsctg14楼
2022-11-18 10:13
回复
专注多肽(金币+2): 谢谢参与
儒墨玉婷15楼
2022-11-18 11:41
回复
专注多肽(金币+2): 谢谢参与
psylhh16楼
2022-11-18 21:54
回复
专注多肽(金币+2): 谢谢参与
XG-WUST17楼
2022-11-18 22:34
回复
专注多肽(金币+2): 谢谢参与
up 发自小木虫IOS客户端
QYAYI18楼
2022-11-18 22:55
回复
专注多肽(金币+2): 谢谢参与
。 发自小木虫IOS客户端
babero19楼
2022-11-20 15:27
回复
专注多肽(金币+2): 谢谢参与
tableman20楼
2022-11-22 09:02
回复
专注多肽(金币+2): 谢谢参与
gavinliu200321楼
2022-11-22 09:39
回复
专注多肽(金币+2): 谢谢参与
1 发自小木虫Android客户端
人间是清欢22楼
2022-11-29 08:29
回复
