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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 网络生活区 » 有奖问答 » 实验讨论 » DEAE纯化蛋白
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

如果不是酶，就不能通过测定酶活力的方式来判断有无目标蛋白质。你说你的目标蛋白质不是酶，那你判断样品中有没有你的目标蛋白质的标准是“SDS-PAGE所得结果，泳道中在预计分子量位置有条带”是吗？如果是这样，会不会存在你的预计大小处有别的蛋白质也存在干扰的可能？或者说你的目标蛋白质在所有谷物栽培种中都是很大很大一坨？
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11楼2022-11-16 10:31:52
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rzrzbs

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2022-11-16 10:26:26
你是把稻谷粉碎之后提取得到的蛋白质？你是通过将提取液的pH调节成酸性使一部分非目标蛋白质沉淀，离心取可溶性蛋白质；再将可溶性蛋白质溶液的pH调节成碱性使一部分非目标蛋白质沉淀，离心取可溶性蛋白质；此时得到 ...

嗯嗯差不多，就是先用碱溶解原料，使碱溶性蛋白溶解，再用酸调到蛋白等电点，使蛋白沉淀，要这个沉淀的蛋白，然后再去过DEAE纯化它

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12楼2022-11-17 15:00:57
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
12楼: Originally posted by rzrzbs at 2022-11-17 15:00:57
嗯嗯差不多，就是先用碱溶解原料，使碱溶性蛋白溶解，再用酸调到蛋白等电点，使蛋白沉淀，要这个沉淀的蛋白，然后再去过DEAE纯化它
...

为什么要用碱去溶解谷物？虽然有能耐受碱性的蛋白质，但耐受程度有限，你需要的蛋白质不一定能耐受，也许会变性沉淀，那你后来再跑电泳就自然没有这个蛋白质了。

你说的情况还不够详细，建议说得更详细。

建议你联系版主把这个帖子转移到“生物科学”版块，因为生物学是实验学科，大多数都没空来这个“有奖问答”版块，你发错版块了。不光没什么人回帖，还有版主把EPI授予了一个答非所问的回帖。
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rzrzbs
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13楼2022-11-23 01:17:19
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rzrzbs

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
13楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2022-11-23 01:17:19
为什么要用碱去溶解谷物？虽然有能耐受碱性的蛋白质，但耐受程度有限，你需要的蛋白质不一定能耐受，也许会变性沉淀，那你后来再跑电泳就自然没有这个蛋白质了。

你说的情况还不够详细，建议说得更详细。

建 ...

哈哈哈哈哈好的，太谢谢您了

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14楼2022-11-24 14:35:23
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愿好_

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2022-11-09 21:28:08
这个填料不太强，我从来不敢用这么碱性的溶液。

用考马斯亮蓝测得出来的蛋白质不一定是没有变性的蛋白质，要看看测定原理。

文献里的蛋白质和你的蛋白质不一定一样，除非氨基酸序列一样。

你好啊虫友们，我想问一下，冲出柱子后必须用考马斯亮蓝测吸光度吗？可不可以直接测280nm下的吸光度呀？

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15楼2024-07-18 00:27:22
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
15楼: Originally posted by 愿好_ at 2024-07-18 00:27:22
你好啊虫友们，我想问一下，冲出柱子后必须用考马斯亮蓝测吸光度吗？可不可以直接测280nm下的吸光度呀？
...

280nm测定得到的不一定是蛋白质，也有色素、黄酮等等。
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16楼2024-07-18 10:38:58
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